24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 105.8
散金: 10
红花: 1
帖子: 103
在线: 37.2小时
虫号: 1663839
注册: 2012-03-04
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 3‘RACE序列比对了居然是26S核糖体RNA基因这是怎么回事求指点！！！！！万分感谢已有4人参与

应用CloneTech Smart RACE试剂盒做3’RACE 应用试剂盒的UPM引物基因特异性引物退火58度延伸2min

得到了750bp 和300bp 的条带测序结果都是26S核糖体RNA基因，不是我要的基因序列

请问我到底哪里出了错？

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有298人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

急急急....BD SMART 3RACE条带不全已经有3人回复
基因克隆得不到全长已经有2人回复
为什么我扩增3‘RACE出来三个片段，都有ploy A 结构已经有9人回复
RACE 问题求助大家已经有6人回复
做RACE老是出现非特异扩增，求助！已经有21人回复
如何确定mRNA的非编码区已经有4人回复
想请教一下做RACE时，特异性引物的设计问题，以及如何根据同源保守区设计引物？已经有14人回复
怎样判断一个新基因序列完不完整呢？已经有0人回复
RACE5‘一直做不出来怎么办？已经有3人回复
【求助/交流】基因克隆已经有5人回复
【求助/交流】关于基因克隆写文章的问题已经有9人回复

1楼2014-04-23 15:48:35

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

karin

木虫 (小有名气)

应助: 18 (小学生)
金币: 2959.6
红花: 3
帖子: 208
在线: 178.5小时
虫号: 1393514
注册: 2011-09-07
性别: MM
专业: 农业昆虫学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yoyo单眼皮: 金币+8, ★★★很有帮助 2014-04-24 21:30:25
yoyo单眼皮: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-05-05 16:07:17

我最近也在用CloneTech Smart RACE试剂盒做5’RACE ，换了若干引物，用的touch-down PCR，测了若干2kb、1kb、750bp、500bp条带，都是核糖体28s，18s，5.8s基因簇里的片段。后来我拿自己的基因和这个基因簇对比了一下，确实有相似度高的部分，后来就选择相似度低的部分设计特异引物，目前正在做，反正不再出以前那些明显不对的条带了。
你可以也比对一下，是不是和我的情况类似呢，还有就是设计特引物的时候选择Tm值高的，以便做touch-down PCR。当参考吧，祝你早日成功！