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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » real time PCR 问题
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酸乳娃娃

新虫 (小有名气)

[求助] real time PCR 问题

我用两对引物扩增沙门氏菌的cdna， cdna进行了10倍梯度稀释。两对引物针对的是两个基因。
一对引物扩增的结果很好。
另外一对引物扩增的结果如图所示。问题是：1，只有第一个稀释度被扩了出来，后3个稀释度都没被扩出来，但是另外一对引物扩增出了所有稀释的样品，为什么？
2， 扩增曲线很怪异的原因？ 3，溶解曲线除了说明引物特异性不高，还能说明什么问题呢？

希望高手解答。

real time PCR 问题
Amplification Plot.jpg


real time PCR 问题-1
Melt Curve Plot jpg.jpg
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1楼 2014-04-11 08:19:51
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Neo2000

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
貌似引物特异性不好

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-04-11 08:32:59
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-04-30 14:12:29
引物二聚体或者颈环结构的Tm值太高，约60℃
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3楼2014-04-11 09:05:51
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