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夏以含

新虫 (初入文坛)

[求助] 超长引物PCR求助 已有1人参与

老板在国外带回一个新质粒要我们做,首先要做一个超长引物的PCR过程,上游引物长达116个碱基,下游引物也有43个碱基,请问:

1.这样的引物要如何分析确定是否可以用于PCR?
2.PCR程序又要怎么设置??

望高手赐教!!不胜感激!
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夏以含

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-01 13:32:00
没必要合成这么长的引物哦,合成这么长不仅价格贵,而且还不一定稳定,关于这个116bp的,你可以合成3条引物,方向分别为正反正,每条各50bp,overlap17bp,就可以满足你的116bp啦,最后面你的43bp照常设43bp反向,四 ...

我现在引物已经合成了,合成之后才知道可以做重叠PCR,所以现在还是希望看这个引物是不是可以P出来,如果实在不行,我再尝试你的方法,谢谢!
3楼2014-04-02 08:48:58
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助! 2014-04-02 22:53:23
没必要合成这么长的引物哦,合成这么长不仅价格贵,而且还不一定稳定,关于这个116bp的,你可以合成3条引物,方向分别为正反正,每条各50bp,overlap17bp,就可以满足你的116bp啦,最后面你的43bp照常设43bp反向,四条引物混合你的模板同时PCR,程序和正常一样,可以得到你的预期产物。
2楼2014-04-01 13:32:00
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