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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 超长引物PCR求助
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夏以含

新虫 (初入文坛)

[求助] 超长引物PCR求助 已有1人参与

老板在国外带回一个新质粒要我们做，首先要做一个超长引物的PCR过程，上游引物长达116个碱基，下游引物也有43个碱基，请问：

1.这样的引物要如何分析确定是否可以用于PCR？
2.PCR程序又要怎么设置？？

望高手赐教！！不胜感激！
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1楼 2014-03-31 20:50:37
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助！ 2014-04-02 22:53:23
没必要合成这么长的引物哦，合成这么长不仅价格贵，而且还不一定稳定，关于这个116bp的，你可以合成3条引物，方向分别为正反正，每条各50bp，overlap17bp，就可以满足你的116bp啦，最后面你的43bp照常设43bp反向，四条引物混合你的模板同时PCR，程序和正常一样，可以得到你的预期产物。
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2楼2014-04-01 13:32:00
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夏以含

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-01 13:32:00
没必要合成这么长的引物哦，合成这么长不仅价格贵，而且还不一定稳定，关于这个116bp的，你可以合成3条引物，方向分别为正反正，每条各50bp，overlap17bp，就可以满足你的116bp啦，最后面你的43bp照常设43bp反向，四 ...

我现在引物已经合成了，合成之后才知道可以做重叠PCR，所以现在还是希望看这个引物是不是可以P出来，如果实在不行，我再尝试你的方法，谢谢！
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3楼2014-04-02 08:48:58
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