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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 求问蛋白电泳？？！！！！！！
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dreamchen

新虫 (初入文坛)

[求助] 求问蛋白电泳？？！！！！！！ 已有6人参与

做的15%的分离胶，marker条带很清晰，但是样品要么看不到 要么特别轻有一点点

样品大概40k~20k
求问哪里有问题
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1楼 2014-03-27 14:26:14
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daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用溴酚蓝试着染一下胶，如果没有的话，就是蛋白提样出问题了
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2楼2014-03-27 14:37:01
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c_jade

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
marker条带清晰，是已经考染过了吗？
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3楼2014-03-27 15:17:12
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开心YY

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般情况下，样品分子量在20~40k我们通常选择12%分离胶，还有可能你的蛋白样品浓度比较低，建议浓缩一下。
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每天给自己一个微笑
4楼2014-03-27 15:40:27
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1. 样品浓度过低，增加上样量。
2. 抗体稀释倍数过大，建议减少稀释倍数，特别是二抗的倍数。
3. 蛋白大小在20--40Kb,建议12%的分离胶。
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5楼2014-03-27 16:43:34
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dreamchen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by c_jade at 2014-03-27 15:17:12
marker条带清晰，是已经考染过了吗？

对 染过 marker很好  样品特别特别浅一点点
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6楼2014-03-27 19:30:46
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dreamchen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 开心YY at 2014-03-27 15:40:27
一般情况下，样品分子量在20~40k我们通常选择12%分离胶，还有可能你的蛋白样品浓度比较低，建议浓缩一下。

蛋白应该不到1mg/ml的样子
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7楼2014-03-27 19:31:51
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jmcookie

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by dreamchen at 2014-03-27 19:31:51
蛋白应该不到1mg/ml的样子...

不知道你的上样量是多少，可以试着做一个上样量梯度看看效果，如果是你的蛋白浓度的问题应该能够很清楚的反应出来
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8楼2014-03-27 22:46:18
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c_jade

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dreamchen at 2014-03-27 19:30:46
对 染过 marker很好  样品特别特别浅一点点...

那肯定就是蛋白浓度的问题了。测得蛋白浓度是否准确，上样量是否偏少？
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9楼2014-03-28 09:19:03
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kinda_

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
9楼: Originally posted by c_jade at 2014-03-28 09:19:03
那肯定就是蛋白浓度的问题了。测得蛋白浓度是否准确，上样量是否偏少？...

楼主是在做WB？会不会是蛋白丰度低？或者抗体不行？跑胶应该是没什么问题的，不知道你的内参跑得怎么样？
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10楼2014-03-28 09:39:03
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