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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重叠PCR要怎么做---来改造质粒的酶切位点
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jessttt

金虫 (小有名气)

[求助] 重叠PCR要怎么做---来改造质粒的酶切位点 已有1人参与

我的空载有5‘ECORI-----XHOLI3'这两个酶切位点，现在我要毁掉他们，变成5'XHOLI----ECORI3'的酶切位点，请问重叠PCR能做出来吗？我没做过重叠PCR，请问引物该怎么设计？然后怎样酶切，连接.....？

请亲们高抬贵手，详细解答一下下
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1楼 2014-03-26 12:46:55
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励回帖交流 2014-03-26 18:03:11
改造载体不好改造。看你的两端是5‘ECORI-----XHOLI3'，是不是片段两端是5'XHOLI----ECORI3'的酶切位点？
如果是这样，那么在片段两端加5‘ECORI-----XHOLI3'的酶切位点吧。
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2楼2014-03-26 15:52:01
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 20:10:07
你这个问题可以有很多解决方案
你要仔细观察你现在载体的MCS
灭掉一个酶切位点最简单的就是切开之后补平或切平，再连接，这也是产生新酶切位点的一种方式。
或者你找更上下游的酶切位点，再换进去你要的酶切位点顺序
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-26 21:58:31
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