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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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jessttt

金虫 (小有名气)

[求助] 重叠PCR要怎么做---来改造质粒的酶切位点 已有1人参与

我的空载有5‘ECORI-----XHOLI3'这两个酶切位点,现在我要毁掉他们,变成5'XHOLI----ECORI3'的酶切位点,请问重叠PCR能做出来吗?我没做过重叠PCR,请问引物该怎么设计?然后怎样酶切,连接.....?

请亲们高抬贵手,详细解答一下下
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励回帖交流 2014-03-26 18:03:11
改造载体不好改造。看你的两端是5‘ECORI-----XHOLI3',是不是片段两端是5'XHOLI----ECORI3'的酶切位点?
如果是这样,那么在片段两端加5‘ECORI-----XHOLI3'的酶切位点吧。
2楼2014-03-26 15:52:01
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 20:10:07
你这个问题可以有很多解决方案
你要仔细观察你现在载体的MCS
灭掉一个酶切位点最简单的就是切开之后补平或切平,再连接,这也是产生新酶切位点的一种方式。
或者你找更上下游的酶切位点,再换进去你要的酶切位点顺序
3楼2014-03-26 21:58:31
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