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三蛰

铜虫 (小有名气)

[求助] 有关是不是引物二聚体的分析 已有5人参与

如图,DL5000Maker 。1,2泳道是我用提取的酵母基因组DNA加引物得到的结果,3泳道是只加引物(用ddH2O代替酵母基因组DNA)作为对照。4,5是我为了验证酵母基因组DNA作为PCR模板的有效性做的对照(用25sRNA的引物扩增的产物)。
现在问题来了,如果1,2得到的是产物,那么3泳道没有酵母基因组DNA作为模板也有一样大小的条带;另外,3泳道应该是引物二聚体,如果1,2泳道也是引物二聚体,问题是为什么比3泳道的亮很多。。。
希望大侠们不吝赐教!

有关是不是引物二聚体的分析
图片1.jpg
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我不会!
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yyshpy007

禁虫 (正式写手)


感谢参与,应助指数 +1
三蛰(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-03-24 09:17:34
本帖内容被屏蔽

2楼2014-03-24 00:24:28
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-03-24 09:17:42
第三泳道估计有污染,最下面比较弱的带是二聚体。
hehe
3楼2014-03-24 08:03:36
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-03-24 09:17:50
泳道3除了小片段的带外,上面还有两条比较浅的带,应该是体系有污染。
4楼2014-03-24 08:21:55
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三蛰

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yyshpy007 at 2014-03-24 00:24:28
水里扩出东西的可能性是存在的,引物二聚体不会超过一百的

问题是我用的是灭了菌的双蒸水。。。如果同是从水里面扩增出来的东西,那么3和1,2亮度差别那么多呀,呜呜呜。
我不会!
5楼2014-03-24 14:37:46
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三蛰

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by liuderong at 2014-03-24 08:21:55
泳道3除了小片段的带外,上面还有两条比较浅的带,应该是体系有污染。

我想知道为什么会有3用到的小片段,污染的话也就是说1,2,3泳道的小片段都是污染所致吗?
我不会!
6楼2014-03-24 14:39:56
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三蛰

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-03-24 08:03:36
第三泳道估计有污染,最下面比较弱的带是二聚体。

我也想他是引物二聚体,不过1,2泳道的大小与第三泳道的一样大,而且属于对照系统,应该也是引物二聚体。那么为啥会出现明暗差距这么大,我做过好多次这种对照,都是这样。搞不明白。谢谢赐教
我不会!
7楼2014-03-24 14:41:39
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

第三泳道有污染。
8楼2014-03-24 16:25:49
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refreshing11

新虫 (正式写手)

我也遇到和你同样的问题,加了模板的比阴性对照的引物二聚体还要亮,你找到原因了吗?望不吝赐教
9楼2014-04-28 22:50:40
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

首先你要清楚你的目的片段是多大?
10楼2014-04-28 23:40:43
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