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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 有关是不是引物二聚体的分析
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三蛰

铜虫 (小有名气)

[求助] 有关是不是引物二聚体的分析 已有5人参与

如图，DL5000Maker 。1，2泳道是我用提取的酵母基因组DNA加引物得到的结果，3泳道是只加引物（用ddH2O代替酵母基因组DNA）作为对照。4,5是我为了验证酵母基因组DNA作为PCR模板的有效性做的对照（用25sRNA的引物扩增的产物）。
现在问题来了，如果1,2得到的是产物，那么3泳道没有酵母基因组DNA作为模板也有一样大小的条带；另外，3泳道应该是引物二聚体，如果1,2泳道也是引物二聚体，问题是为什么比3泳道的亮很多。。。
希望大侠们不吝赐教！

有关是不是引物二聚体的分析
图片1.jpg
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我不会！
1楼 2014-03-23 22:01:32
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yyshpy007

禁虫 (正式写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
三蛰(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-03-24 09:17:34
本帖内容被屏蔽
2楼2014-03-24 00:24:28
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-03-24 09:17:42
第三泳道估计有污染，最下面比较弱的带是二聚体。
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hehe
3楼2014-03-24 08:03:36
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-03-24 09:17:50
泳道3除了小片段的带外，上面还有两条比较浅的带，应该是体系有污染。
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4楼2014-03-24 08:21:55
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三蛰

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yyshpy007 at 2014-03-24 00:24:28
水里扩出东西的可能性是存在的，引物二聚体不会超过一百的

问题是我用的是灭了菌的双蒸水。。。如果同是从水里面扩增出来的东西，那么3和1，2亮度差别那么多呀，呜呜呜。
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我不会！
5楼2014-03-24 14:37:46
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三蛰

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liuderong at 2014-03-24 08:21:55
泳道3除了小片段的带外，上面还有两条比较浅的带，应该是体系有污染。

我想知道为什么会有3用到的小片段，污染的话也就是说1，2，3泳道的小片段都是污染所致吗？
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我不会！
6楼2014-03-24 14:39:56
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三蛰

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-03-24 08:03:36
第三泳道估计有污染，最下面比较弱的带是二聚体。

我也想他是引物二聚体，不过1，2泳道的大小与第三泳道的一样大，而且属于对照系统，应该也是引物二聚体。那么为啥会出现明暗差距这么大，我做过好多次这种对照，都是这样。搞不明白。谢谢赐教
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我不会！
7楼2014-03-24 14:41:39
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
第三泳道有污染。
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8楼2014-03-24 16:25:49
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refreshing11

新虫 (正式写手)
我也遇到和你同样的问题，加了模板的比阴性对照的引物二聚体还要亮，你找到原因了吗？望不吝赐教
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9楼2014-04-28 22:50:40
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

首先你要清楚你的目的片段是多大？
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10楼2014-04-28 23:40:43
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