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冰糖-葫芦娃

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 如何检测目的片段转没转到质粒上？已有10人参与

将目的基因片段连接到载体上，再导入到大肠杆菌中，LB培养基上长出了白斑，下一步我想挑一些单菌落做一下PCR，想看看目的片段转没转到质粒上，是将单菌落挑到加有氨苄的LB液体培养基里培养过夜，然后用这个菌液直接PCR么？还是提取质粒做PCR？如果这样该如何操作呢？有些茫然啊~

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1楼 2014-03-23 21:11:02

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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-25 12:32:49

我们实验室一般是先菌落PCR，再摇菌步骤如下。
1.用牙签挑一下菌落在有抗性的LB固体板子上划上两三道线并在板子背面划线部位标注一下，37度培养。
2.牙签放在PCR溶液里稍微转动几下保证菌脱落到PCR体系中。
3.直接进行PCR，跑胶。确定阳性菌。
4.选取对应编号的划线菌，进行摇菌。
5.提取质粒，酶切，或测序验证。