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Yocan2012

新虫 (小有名气)

[求助] 植物基因组提取 已有4人参与

最近在做植物基因组提取,用来测序建库使用的。使用的是植物(菊科)的种子作为材料,液氮研磨破碎,CTAB法提取,除了没有使用Tris饱和酚外,其他完全按照CTAB法进行操作。结果见图。此外,有时候提取到的只有250 bp大小的片段,有的时候根本什么也提取不到。但是,在年前做预实验的时候提取的效果是非常好的,20 kb的条带非常好。现在却怎么都重复不出来。求高人指点。
上图为现在的情况,下图为预实验提取的情况,所用maker均为Takara DL15000。

植物基因组提取
未标题-1.jpg


植物基因组提取-1
提取-1.png

[ Last edited by Yocan2012 on 2014-3-18 at 13:18 ]
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
Yocan2012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-19 16:06:09
植物DNA的提取技术及注意事项
http://chinaaoju.blog.163.com/bl ... 961201211136154169/
4楼2014-03-18 16:33:00
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starseeker

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
Yocan2012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-19 16:05:12
你的电泳图下方过亮有点看不清楚,但粗略看可能是你提到的DNA降解了,你在提取过程中有没有剧烈的震荡?
2楼2014-03-18 16:00:55
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yipan

铜虫 (职业作家)


【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
Yocan2012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-19 16:05:31
不要剧烈摇晃,操作应该温和,这样才能最大化的保证DNA的完整性。
3楼2014-03-18 16:14:50
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花雨sky

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Yocan2012(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-19 16:07:17
用不用tris饱和酚问题不是很大,我没有用也还是提出来了
1、药品有没有问题
2、研磨是否充分,这个很关键,如果研磨不充分的话,就得不到CTAB-核酸复合物,自然就看不到DNA了
3、浸提、抽提等各个步骤的动作一定要温和。
这有个经验总结,希望能对你有帮助http://huanansu211.blog.163.com/ ... 544720105291551541/
5楼2014-03-18 16:38:54
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