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Yocan2012

新虫 (小有名气)

[求助] 植物基因组提取已有4人参与

最近在做植物基因组提取，用来测序建库使用的。使用的是植物（菊科）的种子作为材料，液氮研磨破碎，CTAB法提取，除了没有使用Tris饱和酚外，其他完全按照CTAB法进行操作。结果见图。此外，有时候提取到的只有250 bp大小的片段，有的时候根本什么也提取不到。但是，在年前做预实验的时候提取的效果是非常好的，20 kb的条带非常好。现在却怎么都重复不出来。求高人指点。
上图为现在的情况，下图为预实验提取的情况，所用maker均为Takara DL15000。

植物基因组提取
未标题-1.jpg


植物基因组提取-1
提取-1.png

[ Last edited by Yocan2012 on 2014-3-18 at 13:18 ]
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1楼2014-03-18 13:16:07
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yipan

铜虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Yocan2012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-19 16:05:31
不要剧烈摇晃，操作应该温和，这样才能最大化的保证DNA的完整性。
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3楼2014-03-18 16:14:50
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starseeker

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Yocan2012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-19 16:05:12
你的电泳图下方过亮有点看不清楚，但粗略看可能是你提到的DNA降解了，你在提取过程中有没有剧烈的震荡？
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2楼2014-03-18 16:00:55
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Yocan2012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-19 16:06:09
植物DNA的提取技术及注意事项
http://chinaaoju.blog.163.com/bl ... 961201211136154169/
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4楼2014-03-18 16:33:00
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花雨sky

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Yocan2012(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-19 16:07:17
用不用tris饱和酚问题不是很大，我没有用也还是提出来了
1、药品有没有问题
2、研磨是否充分，这个很关键，如果研磨不充分的话，就得不到CTAB-核酸复合物，自然就看不到DNA了
3、浸提、抽提等各个步骤的动作一定要温和。
这有个经验总结，希望能对你有帮助http://huanansu211.blog.163.com/ ... 544720105291551541/
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5楼2014-03-18 16:38:54
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