24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2046  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Yocan2012

新虫 (小有名气)

[求助] 植物基因组提取已有4人参与

最近在做植物基因组提取,用来测序建库使用的。使用的是植物(菊科)的种子作为材料,液氮研磨破碎,CTAB法提取,除了没有使用Tris饱和酚外,其他完全按照CTAB法进行操作。结果见图。此外,有时候提取到的只有250 bp大小的片段,有的时候根本什么也提取不到。但是,在年前做预实验的时候提取的效果是非常好的,20 kb的条带非常好。现在却怎么都重复不出来。求高人指点。
上图为现在的情况,下图为预实验提取的情况,所用maker均为Takara DL15000。

植物基因组提取
未标题-1.jpg


植物基因组提取-1
提取-1.png

[ Last edited by Yocan2012 on 2014-3-18 at 13:18 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花雨sky

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by Yocan2012 at 2014-03-18 21:46:02
您的连接已仔细看过,很有帮助。可能离心的过程中温度有点低,不过在加乙醇和乙酸钠之后白色絮状物还是很多的,应该不会是DNA被离心下去了吧。...

不就是要收集沉淀的嘛,我加完乙醇和乙酸钠之后沉淀半个小时,离心收集沉淀,再进行乙醇清洗沉淀。要是你加完之后白色絮状物很多的话就可以直接离心收集沉淀,,不用等半个小时了,这种做法的前提是你的DNA量要多。抽提时候低温,CTAB浸提后离心要上清液的这次离心温度不能低于15度哟。
10楼2014-03-19 18:54:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

starseeker

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
Yocan2012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-19 16:05:12
你的电泳图下方过亮有点看不清楚,但粗略看可能是你提到的DNA降解了,你在提取过程中有没有剧烈的震荡?
2楼2014-03-18 16:00:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yipan

铜虫 (职业作家)


【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
Yocan2012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-19 16:05:31
不要剧烈摇晃,操作应该温和,这样才能最大化的保证DNA的完整性。
3楼2014-03-18 16:14:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
Yocan2012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-19 16:06:09
植物DNA的提取技术及注意事项
http://chinaaoju.blog.163.com/bl ... 961201211136154169/
4楼2014-03-18 16:33:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见