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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 植物基因组提取
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Yocan2012

新虫 (小有名气)

[求助] 植物基因组提取已有4人参与

最近在做植物基因组提取，用来测序建库使用的。使用的是植物（菊科）的种子作为材料，液氮研磨破碎，CTAB法提取，除了没有使用Tris饱和酚外，其他完全按照CTAB法进行操作。结果见图。此外，有时候提取到的只有250 bp大小的片段，有的时候根本什么也提取不到。但是，在年前做预实验的时候提取的效果是非常好的，20 kb的条带非常好。现在却怎么都重复不出来。求高人指点。
上图为现在的情况，下图为预实验提取的情况，所用maker均为Takara DL15000。

植物基因组提取
未标题-1.jpg


植物基因组提取-1
提取-1.png

[ Last edited by Yocan2012 on 2014-3-18 at 13:18 ]
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1楼2014-03-18 13:16:07
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花雨sky

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by Yocan2012 at 2014-03-18 21:46:02
您的连接已仔细看过，很有帮助。可能离心的过程中温度有点低，不过在加乙醇和乙酸钠之后白色絮状物还是很多的，应该不会是DNA被离心下去了吧。...

不就是要收集沉淀的嘛，我加完乙醇和乙酸钠之后沉淀半个小时，离心收集沉淀，再进行乙醇清洗沉淀。要是你加完之后白色絮状物很多的话就可以直接离心收集沉淀，，不用等半个小时了，这种做法的前提是你的DNA量要多。抽提时候低温，CTAB浸提后离心要上清液的这次离心温度不能低于15度哟。
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10楼2014-03-19 18:54:34
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starseeker

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Yocan2012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-19 16:05:12
你的电泳图下方过亮有点看不清楚，但粗略看可能是你提到的DNA降解了，你在提取过程中有没有剧烈的震荡？
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2楼2014-03-18 16:00:55
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yipan

铜虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Yocan2012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-19 16:05:31
不要剧烈摇晃，操作应该温和，这样才能最大化的保证DNA的完整性。
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3楼2014-03-18 16:14:50
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Yocan2012(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-19 16:06:09
植物DNA的提取技术及注意事项
http://chinaaoju.blog.163.com/bl ... 961201211136154169/
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4楼2014-03-18 16:33:00
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