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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 纳米生物材料 » 帮忙看看哪里出问题了···考马斯亮蓝法测蛋白
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千里幽寻

金虫 (小有名气)

[求助] 帮忙看看哪里出问题了···考马斯亮蓝法测蛋白

考马斯亮蓝：100mg G250+50ml 95%乙醇+100ml磷酸，定容1000ml ，抽滤
标准蛋白：  0.5mgSBA，定容至500ml

标准曲线方法：
                                          0             1            2           3          4        5   
蛋白添加量（0.1mg/ml）        0            0.2         0.4       0.6        0.8       1.0   （ml）
       水     （ml）                  1            0.8         0.6      0.4         0.2       0
考马斯亮蓝（ml）                  4             4            4         4            4         4
每个浓度做三个平行
测出来的吸光度如果不算零点，R*2值很高，可是如果加上零点的话，差别很大啊。下面是图

帮忙看看哪里出问题了···考马斯亮蓝法测蛋白
带零点.jpg


帮忙看看哪里出问题了···考马斯亮蓝法测蛋白-1
无零点.jpg
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Iamaslowwalker,butIneverwalkbackwards.
1楼 2014-03-14 11:21:18
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feiwen_1987

新虫 (初入文坛)
好像你那个标准蛋白的配制有点不对，因为我用过，而且那个牛血清白蛋白的含量应该是称取0.01g定容到100ml的容量瓶中，算起来应该是10mg的牛血清蛋白定容到100ml的容量瓶。而且我加的考马斯亮蓝量是5ml。要做空白试验，你这个零点没有连接点，应该没有做空白试验吧。
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10楼2015-08-03 18:10:09
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千里幽寻

金虫 (小有名气)
用的是玻璃比色皿，595nm
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Iamaslowwalker,butIneverwalkbackwards.
2楼2014-03-14 11:25:13
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yuchuanbai

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2014-03-14 14:31:03
你用什么做空白？蛋白添加量为0的样品不是空白吗？就是你说的零点吧，不明白你用什么做的空白。
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3楼2014-03-14 14:07:41
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千里幽寻

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuchuanbai at 2014-03-14 14:07:41
你用什么做空白？蛋白添加量为0的样品不是空白吗？就是你说的零点吧，不明白你用什么做的空白。

去离子水1ml+4ml考马斯亮蓝染液做空白
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Iamaslowwalker,butIneverwalkbackwards.
4楼2014-03-14 14:11:49
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