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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 细菌的RT-PCR求助
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燕归来0101

银虫 (初入文坛)

[求助] 细菌的RT-PCR求助 已有2人参与

大家好，我想用荧光定量PCR对某种细菌进行定量，现在有该细菌基因组上的一段DNA序列（600bp）,和一对能扩增出这段序列中156bp片段的特异性引物，由于之前没接触过RT-PCR，想请教大家该如何进行，怎样才能对我的细菌进行定量？需要购买哪些什么试剂、试剂盒的？RT-PCR仪器学院里有。
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1楼 2014-03-12 21:30:42
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燕归来0101

银虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-03-12 21:41:56
试剂一般用SYBR Green（Roche，TAKARA），耗材需要专门的耗材跟仪器相关，你需要设计定量引物一般用软件设计要求较高，引物需要先得到扩增效率。选择好的扩增效率的引物再进行定量。网上有很多关于定量的文件你可以 ...

谢谢，我的引物用普通PCR验证，效果不错，特异性也强，其他细菌做对照都没有条带。荧光定量PCR是不是也可以直接用基因组DNA或者菌液做模板呢？
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5楼2014-03-13 16:55:11
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-03-13 08:40:31
燕归来0101: 金币+10, ★有帮助 2014-03-14 12:02:10
试剂一般用SYBR Green（Roche，TAKARA），耗材需要专门的耗材跟仪器相关，你需要设计定量引物一般用软件设计要求较高，引物需要先得到扩增效率。选择好的扩增效率的引物再进行定量。网上有很多关于定量的文件你可以看看。
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燕归来0101
hehe
2楼2014-03-12 21:41:56
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若溪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
燕归来0101(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-13 18:44:22
燕归来0101: 金币+9, ★有帮助 2014-03-14 12:02:21
楼主对细菌进行定量，很少有用荧光定量的啊，一般流式细胞仪就可以，以前见过文献对病毒进行绝对定量的，对细菌进行定量还是第一次。RT-PCR用普通的PCR仪器就可进行，不难，但是需要RT-PCR试剂盒。
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没有比脚更长的路，没有比人更高的山
3楼2014-03-13 10:11:21
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燕归来0101

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 若溪 at 2014-03-13 10:11:21
楼主对细菌进行定量，很少有用荧光定量的啊，一般流式细胞仪就可以，以前见过文献对病毒进行绝对定量的，对细菌进行定量还是第一次。RT-PCR用普通的PCR仪器就可进行，不难，但是需要RT-PCR试剂盒。

我是要对一种植物病原菌进行定量的，如果单一对这种纯培养的菌定量当然办法很多，但是土壤和植物组织中也有别的菌干扰啊，所以想用特异性的分子方法。
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4楼2014-03-13 16:52:30
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