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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何计算引物的Tm值？
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呀薯条

金虫 (小有名气)

[求助] 如何计算引物的Tm值？ 已有3人参与

primer 5 可以直接用来计算TM值吗？因为目的基因一样，所以我直接采用文献中的引物，现在要进行PCR，那Tm值如何确定？我在网上有看到Tm cacluator  网站，那里边的参数如何选择？其中product group 和下一行中的product 如何选择？如图所示，它们表示什么意思？
网址如下：https://www.neb.com/tools-and-re ... tools/tm-calculator
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    • 2014-03-05 16:09:36, 16 K

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1楼 2014-03-05 16:10:11
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条: 金币+1 2014-03-06 08:56:02
呀薯条(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 01:00:03
我们拿到引物一般先跑个梯度选择好的温度，再跑PCR。
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hehe
4楼2014-03-05 21:06:26
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yanfang2012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条: 金币+1, ★有帮助 2014-03-05 19:19:13
primer5是可以对引物评估并给出Tm值的，合成引物的订单也会标示的
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believe yourself！
2楼2014-03-05 19:09:31
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呀薯条

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yanfang2012 at 2014-03-05 19:09:31
primer5是可以对引物评估并给出Tm值的，合成引物的订单也会标示的

因为之前设计引物的时候，就大概记得有好几种引物可以选择，最后就选了一个，因为时间太久了，所以具体的温度就不记得了。不过还是谢谢啊。我后来解决这个问题了，我同学有个计算Tm的软件
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3楼2014-03-05 19:20:35
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条: 金币+2, ★有帮助 2014-03-06 08:56:14
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 00:59:55
需要根据酶来选择Tm值的计算方法，可以看一下酶的说明书。

一般使用Taq酶的Tm值计算方法：长度为25mer以下的引物，Tm计算公式为：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)
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5楼2014-03-05 21:14:58
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