| 查看: 6550 | 回复: 8 | ||
nnxqwei至尊木虫 (职业作家)
|
[求助]
求助酶的Kcat 计算！
|
|
求助Kcat 计算！ 我用终浓度为100nM 纯酶（分子量440ＫDa）对一类底物进行动力学测定，比活力为68Ｕ/mg, 通过双曲线法得到底物的km值为0.2 mM, Vmax为40.22 mM/min，我用常用的公式计算酶对该底物的Kcat＝Vmax/[Ｅ]，结果好象不对！！！搞了好长时间，越来越糊涂了，请高手支招呀，谢谢！Kcat 应该得多少呢，应该如何计算呢？ [ Last edited by nnxqwei on 2013-7-3 at 15:30 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
269求调剂
已经有6人回复
-
297求调剂
已经有20人回复
-
297求调剂
已经有28人回复
-
267求调剂
已经有5人回复
-
考研调剂
已经有6人回复
-
314求调剂
已经有9人回复
-
285求调剂
已经有7人回复
-
一志愿矿大，材料工程专硕314分，0856可调都可以
已经有10人回复
-
还有化工二轮调剂的学校吗
已经有31人回复
-
一志愿211 0703化学 346分求调剂
已经有15人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于土壤蔗糖酶活性的计算
已经有13人回复
- 如何计算一个酶促反应的平衡常数？学生物的，不懂这个。
已经有3人回复
- 急需求解两道生物化学工程的两道计算题（monod方程及pH和酶浓度）
已经有8人回复
- 酶活力计算公式，求助啊
已经有5人回复
- 酶偶联法测酶活力，怎么计算啊
已经有9人回复
- 关于酶用量的计算
已经有6人回复
- 关于比酶活的计算
已经有4人回复
- 计算引物退火温度时末端加的酶切位点计算在内吗？
已经有5人回复
- 酶催化参数 Km Vmax、 E和Mw知道后,怎么来计算Kcat??
已经有4人回复
- 请教过氧化物酶活性POD计算方法
已经有8人回复
- 【求助/交流】酶反应动力学参数如何计算
已经有5人回复
- 【求助】酶催化中TON（turnover number），TOF（turnover frequency）的计算方法
已经有6人回复
- 【求助/交流】酶液稀释倍数的计算
已经有5人回复
- 【求助/交流】请教一个酶学计算题
已经有4人回复
- 【其他】酶的比活力计算
已经有6人回复
- 求助抗坏血酸过氧化物酶和谷胱甘肽还原酶活性的计算方法
已经有3人回复
- 【求助/交流】关于纤维素酶ONOZUKA R-10的FPU计算
已经有6人回复
- 【求助/交流】纤维素酶降解后糖化率如何计算
已经有5人回复
2楼2013-07-04 11:47:09
qqxs
木虫 (正式写手)
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 3933.3
- 散金: 1003
- 红花: 4
- 帖子: 337
- 在线: 40.8小时
- 虫号: 1108858
- 注册: 2010-09-27
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2013-07-04 12:38:00
nnxqwei
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 贵宾: 0.01
- 金币: 44569.4
- 散金: 66
- 红花: 110
- 帖子: 4711
- 在线: 781.9小时
- 虫号: 50626
- 注册: 2004-07-13
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
4楼2013-07-04 19:17:35
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-06 14:00:12
nnxqwei: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-07-23 21:06:15
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-06 14:00:12
nnxqwei: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-07-23 21:06:15
|
以Lineweaver-Burk双倒数作图最常用，测定和计算简便，也比较准确。 将米-曼氏方程进行倒数处理，得下列方程： 以1/V0为纵坐标，1/[S]为横坐标作图可得一直线。纵轴截距为1/Vmax，斜率为Km/Vmax，横轴截距为-1/Km。举例 1/V = 240.5 + 577.2 x 1/[S] ， Vmax is 1/240.5 = 0.00416 ， Km = 0.00416 x 577.2 = 2.40 。 ” 100nM 纯酶（分子量440ＫDa）对一类底物进行动力学测定，比活力为68Ｕ/mg “，100nM*440000 (ng/L)=44000 000/1000 000 (mg/L)=44 （mg/L） ，计算得酶浓度时44mg/L 。 68U/mg*44mg/L=2992U/L=2.992u/ml ，计算得到比酶活是2.992u/ml，约3u/ml。不知道酶活是如何定义的，如果提供的信息、数据更多，更好确定。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
nnxqwei5楼2013-07-06 11:55:06
nnxqwei
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 贵宾: 0.01
- 金币: 44569.4
- 散金: 66
- 红花: 110
- 帖子: 4711
- 在线: 781.9小时
- 虫号: 50626
- 注册: 2004-07-13
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
6楼2013-07-06 17:22:03
7楼2013-09-12 12:15:59
hl16010921
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 7
- 应助: 100 (初中生)
- 金币: 2218.4
- 红花: 8
- 帖子: 343
- 在线: 285.2小时
- 虫号: 2514830
- 注册: 2013-06-20
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nnxqwei: 金币+10, ★★★很有帮助, 很有参考意义! 2013-09-21 16:37:42
nnxqwei: 金币+10, ★★★很有帮助, 很有参考意义! 2013-09-21 16:37:42
|
Kcat是用Vmax算出来的，而Vmax显然是外推得到的。而米氏方程完成的条件是在测定过程中底物浓度变化不大，在底物浓度太低时，由于底物的量少，变化率可能较大加上系统的波动（导致不准）而底物浓度太高，速度太快，导致初速度测不准。这样就使得有效数据受两端数据影响很大。所以有时推出的Vmax显得匪夷所思，其实是很正常的。 楼主的计算没有问题，不过0.1uM的酶浓度可能偏高，估计测得的Vmax可能偏低。。kcat可以用s-1表示422200/60=7036.666667s-1。kcat/Km=3,5183,333.33M-1* S-1.应该在合理范围。 |
8楼2013-09-13 11:13:17
9楼2015-09-09 22:03:10
