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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助酶的Kcat 计算！
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nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 求助酶的Kcat 计算！

求助Kcat 计算！
我用终浓度为100nM 纯酶（分子量440ＫDa）对一类底物进行动力学测定，比活力为68Ｕ/mg, 通过双曲线法得到底物的km值为0.2 mM, Vmax为40.22　mM/min，我用常用的公式计算酶对该底物的Kcat＝Vmax/[Ｅ]，结果好象不对！！！搞了好长时间，越来越糊涂了，请高手支招呀，谢谢！Kcat 应该得多少呢，应该如何计算呢？

[ Last edited by nnxqwei on 2013-7-3 at 15:30 ]
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1楼 2013-07-02 22:17:32
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-06 14:00:12
nnxqwei: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-07-23 21:06:15
以Lineweaver-Burk双倒数作图最常用，测定和计算简便，也比较准确。 将米-曼氏方程进行倒数处理，得下列方程： 以1/V0为纵坐标，1/[S]为横坐标作图可得一直线。纵轴截距为1/Vmax，斜率为Km/Vmax，横轴截距为-1/Km。举例 1/V = 240.5 + 577.2 x  1/[S] ， Vmax is 1/240.5 = 0.00416 ，  Km = 0.00416 x 577.2 = 2.40 。
” 100nM 纯酶（分子量440ＫDa）对一类底物进行动力学测定，比活力为68Ｕ/mg “，100nM*440000 (ng/L)=44000 000/1000 000 (mg/L)=44 （mg/L） ，计算得酶浓度时44mg/L 。 68U/mg*44mg/L=2992U/L=2.992u/ml ，计算得到比酶活是2.992u/ml，约3u/ml。不知道酶活是如何定义的，如果提供的信息、数据更多，更好确定。
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nnxqwei
为什么
5楼2013-07-06 11:55:06
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查看全部 9 个回答

水穷云起时

新虫 (初入文坛)
我最近也在研究酶
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耐得住寂寞，才能守得住繁华
2楼2013-07-04 11:47:09
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qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+2 2013-07-04 15:42:12
我觉得你是不是单位换算有点问题，蛋白浓度100nM是指100 nmol/kg吗？Vmax值40.22mM/min是40 mmol/ min.kg吗？这两个单位查了10^6倍，一定是哪一个弄错了。
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3楼2013-07-04 12:38:00
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nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by qqxs at 2013-07-04 12:38:00
我觉得你是不是单位换算有点问题，蛋白浓度100nM是指100 nmol/kg吗？Vmax值40.22mM/min是40 mmol/ min.kg吗？这两个单位查了10^6倍，一定是哪一个弄错了。

谢谢参与讨论！蛋白浓度100nM，为酶反应的摩尔终浓度。Vmax值40.22mM/min即为每分钟有40.22mM的产物生成呀。100nM的酶能在1　min之内能转化生成42.22mＭ的产物。
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4楼2013-07-04 19:17:35
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