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nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 求助酶的Kcat 计算!

求助Kcat 计算!
我用终浓度为100nM 纯酶(分子量440KDa)对一类底物进行动力学测定,比活力为68U/mg, 通过双曲线法得到底物的km值为0.2 mM, Vmax为40.22 mM/min,我用常用的公式计算酶对该底物的Kcat=Vmax/[E],结果好象不对!!!搞了好长时间,越来越糊涂了,请高手支招呀,谢谢!Kcat 应该得多少呢,应该如何计算呢?

[ Last edited by nnxqwei on 2013-7-3 at 15:30 ]
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qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
silicare: 金币+2 2013-07-04 15:42:12
我觉得你是不是单位换算有点问题,蛋白浓度100nM是指100 nmol/kg吗?Vmax值40.22mM/min是40 mmol/ min.kg吗?这两个单位查了10^6倍,一定是哪一个弄错了。
3楼2013-07-04 12:38:00
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查看全部 9 个回答

水穷云起时

新虫 (初入文坛)

我最近也在研究酶
耐得住寂寞,才能守得住繁华
2楼2013-07-04 11:47:09
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nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by qqxs at 2013-07-04 12:38:00
我觉得你是不是单位换算有点问题,蛋白浓度100nM是指100 nmol/kg吗?Vmax值40.22mM/min是40 mmol/ min.kg吗?这两个单位查了10^6倍,一定是哪一个弄错了。

谢谢参与讨论!蛋白浓度100nM,为酶反应的摩尔终浓度。Vmax值40.22mM/min即为每分钟有40.22mM的产物生成呀。100nM的酶能在1 min之内能转化生成42.22mM的产物。
4楼2013-07-04 19:17:35
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
137167741: 金币+2, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-07-06 14:00:12
nnxqwei: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-07-23 21:06:15
以Lineweaver-Burk双倒数作图最常用,测定和计算简便,也比较准确。 将米-曼氏方程进行倒数处理,得下列方程: 以1/V0为纵坐标,1/[S]为横坐标作图可得一直线。纵轴截距为1/Vmax,斜率为Km/Vmax,横轴截距为-1/Km。举例 1/V = 240.5 + 577.2 x  1/[S] , Vmax is 1/240.5 = 0.00416 ,  Km = 0.00416 x 577.2 = 2.40 。
” 100nM 纯酶(分子量440KDa)对一类底物进行动力学测定,比活力为68U/mg “,100nM*440000 (ng/L)=44000 000/1000 000 (mg/L)=44 (mg/L) ,计算得酶浓度时44mg/L 。 68U/mg*44mg/L=2992U/L=2.992u/ml ,计算得到比酶活是2.992u/ml,约3u/ml。不知道酶活是如何定义的,如果提供的信息、数据更多,更好确定。

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为什么
5楼2013-07-06 11:55:06
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