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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于土壤蔗糖酶活性的计算
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linshuiyiyi

银虫 (初入文坛)

[求助] 关于土壤蔗糖酶活性的计算 已有1人参与

求助：请哪位大侠指点下，计算土壤蔗糖酶活性时，那个分取倍数是什么？

称取2.***g新鲜土，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8％蔗糖溶液，5ml pH5.5
磷酸缓冲液和0.25ml甲苯。摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。到时取出，迅速过滤。从中吸取滤液1ml，注入50ml容量量瓶中，加3ml 3，5-二硝基水杨酸，并在沸水的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。
溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50ml，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色
计算结果（样品-无土-无基质）*分取倍数/土重。
追加一句，如果因为测定的吸光度值比标线大好多，需要进行稀释，那么稀释后的分取倍数是什么？
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1楼 2013-06-04 12:05:28
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Andyllk

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
zhangxingc: 金币+4, 鼓励热心回帖 2013-06-08 10:17:12
引用回帖:
6楼: Originally posted by linshuiyiyi at 2013-06-06 08:25:34
再弱弱的问您一下，那个分取倍数是从“最后用蒸馏水稀释至50ml，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色”当中的加了蒸馏水的50ml中取么？我当时用分光光度计测量时直接从容量瓶中向比色皿中到得液体测的，这则么算 ...

你现在问题是样品吸光值大于标线是吧？
那你可以开始就取0.5或0.1ml，然后加到容量瓶显色，然后测定吸光值，假如取0.1ml，则分取倍数为20/0.1=200。
也可以对50ml显色液(就是取1ml时)稀释，假如10倍，然后测定，相当于从50ml原液中取5ml测吸光度，(即相当于从原来的1ml取0.1)，分取倍数就是20＊10=200了。其实此时和上面取0.1ml显色效果一样，都是为了减小吸光值。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2013-06-08 01:06:17
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109082004028

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by Andyllk at 2013-06-05 15:26:42
你相当于从20ml(15+5)里去取1ml酶液，然后定容到50ml。那么分取倍数=1/20/50=1/1000

这样解释不对，分取倍数就是10000倍，比色测定时，肯定是直接从定容后的50ml 容量瓶里直接倒一些溶液到比色杯里，进行比色。而不是“从50ml里取xml进行测定”。
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10楼2013-12-01 00:09:41
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wangqunlin

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以先稀释，再DNS测定还原糖含量
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2楼2013-06-04 21:09:38
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Andyllk

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不好意思我上面说的是稀释倍数，分取倍数的话如果是从50ml里取xml进行测定应该是x/1000，如果50ml全部用来测定的话是50/1000=1/20

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2013-06-05 15:34:20
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普通回帖

linshuiyiyi

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangqunlin at 2013-06-04 21:09:38
可以先稀释，再DNS测定还原糖含量

请问  分取倍数是什么？
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3楼2013-06-05 07:41:30
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Andyllk

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你相当于从20ml(15+5)里去取1ml酶液，然后定容到50ml。那么分取倍数=1/20/50=1/1000

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-06-05 15:26:42
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linshuiyiyi

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Andyllk at 2013-06-05 15:34:20
不好意思我上面说的是稀释倍数，分取倍数的话如果是从50ml里取xml进行测定应该是x/1000，如果50ml全部用来测定的话是50/1000=1/20

再弱弱的问您一下，那个分取倍数是从“最后用蒸馏水稀释至50ml，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色”当中的加了蒸馏水的50ml中取么？我当时用分光光度计测量时直接从容量瓶中向比色皿中到得液体测的，这则么算分取倍数？还有 如果样品因为测定的吸光度值比标线大好多 需要稀释，那么分取倍数不受影响么
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6楼2013-06-06 08:25:34
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linshuiyiyi

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Andyllk at 2013-06-08 01:06:17
你现在问题是样品吸光值大于标线是吧？
那你可以开始就取0.5或0.1ml，然后加到容量瓶显色，然后测定吸光值，假如取0.1ml，则分取倍数为20/0.1=200。
也可以对50ml显色液(就是取1ml时)稀释，假如10倍，然后测定， ...

谢谢您   我最近没上小木虫  算是迟到的感谢
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8楼2013-07-07 10:23:53
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墨言2013

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by Andyllk at 2013-06-08 01:06:17
你现在问题是样品吸光值大于标线是吧？
那你可以开始就取0.5或0.1ml，然后加到容量瓶显色，然后测定吸光值，假如取0.1ml，则分取倍数为20/0.1=200。
也可以对50ml显色液(就是取1ml时)稀释，假如10倍，然后测定， ...

楼主高见啊，我想问你一下，最后测得的酶活性的标准大概是哪个数量级啊？？我测了一组数据，但是浮动有点大，谢谢
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做最好的自己！
9楼2013-10-13 11:13:05
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