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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助酶的Kcat 计算！
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nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 求助酶的Kcat 计算！

求助Kcat 计算！
我用终浓度为100nM 纯酶（分子量440ＫDa）对一类底物进行动力学测定，比活力为68Ｕ/mg, 通过双曲线法得到底物的km值为0.2 mM, Vmax为40.22　mM/min，我用常用的公式计算酶对该底物的Kcat＝Vmax/[Ｅ]，结果好象不对！！！搞了好长时间，越来越糊涂了，请高手支招呀，谢谢！Kcat 应该得多少呢，应该如何计算呢？

[ Last edited by nnxqwei on 2013-7-3 at 15:30 ]
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1楼2013-07-02 22:17:32
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hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nnxqwei: 金币+10, ★★★很有帮助, 很有参考意义! 2013-09-21 16:37:42
Kcat是用Vmax算出来的，而Vmax显然是外推得到的。而米氏方程完成的条件是在测定过程中底物浓度变化不大，在底物浓度太低时，由于底物的量少，变化率可能较大加上系统的波动（导致不准）而底物浓度太高，速度太快，导致初速度测不准。这样就使得有效数据受两端数据影响很大。所以有时推出的Vmax显得匪夷所思，其实是很正常的。
楼主的计算没有问题，不过0.1uM的酶浓度可能偏高，估计测得的Vmax可能偏低。。kcat可以用s-1表示422200/60=7036.666667s-1。kcat/Km=3,5183,333.33M-1* S-1.应该在合理范围。
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8楼2013-09-13 11:13:17
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水穷云起时

新虫 (初入文坛)
我最近也在研究酶
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耐得住寂寞，才能守得住繁华
2楼2013-07-04 11:47:09
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qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+2 2013-07-04 15:42:12
我觉得你是不是单位换算有点问题，蛋白浓度100nM是指100 nmol/kg吗？Vmax值40.22mM/min是40 mmol/ min.kg吗？这两个单位查了10^6倍，一定是哪一个弄错了。
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3楼2013-07-04 12:38:00
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nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by qqxs at 2013-07-04 12:38:00
我觉得你是不是单位换算有点问题，蛋白浓度100nM是指100 nmol/kg吗？Vmax值40.22mM/min是40 mmol/ min.kg吗？这两个单位查了10^6倍，一定是哪一个弄错了。

谢谢参与讨论！蛋白浓度100nM，为酶反应的摩尔终浓度。Vmax值40.22mM/min即为每分钟有40.22mM的产物生成呀。100nM的酶能在1　min之内能转化生成42.22mＭ的产物。
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4楼2013-07-04 19:17:35
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