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nnxqwei至尊木虫 (职业作家)
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[求助]
求助酶的Kcat 计算！
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求助Kcat 计算！ 我用终浓度为100nM 纯酶（分子量440ＫDa）对一类底物进行动力学测定，比活力为68Ｕ/mg, 通过双曲线法得到底物的km值为0.2 mM, Vmax为40.22 mM/min，我用常用的公式计算酶对该底物的Kcat＝Vmax/[Ｅ]，结果好象不对！！！搞了好长时间，越来越糊涂了，请高手支招呀，谢谢！Kcat 应该得多少呢，应该如何计算呢？ [ Last edited by nnxqwei on 2013-7-3 at 15:30 ] |
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hl16010921
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nnxqwei: 金币+10, ★★★很有帮助, 很有参考意义! 2013-09-21 16:37:42
nnxqwei: 金币+10, ★★★很有帮助, 很有参考意义! 2013-09-21 16:37:42
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Kcat是用Vmax算出来的，而Vmax显然是外推得到的。而米氏方程完成的条件是在测定过程中底物浓度变化不大，在底物浓度太低时，由于底物的量少，变化率可能较大加上系统的波动（导致不准）而底物浓度太高，速度太快，导致初速度测不准。这样就使得有效数据受两端数据影响很大。所以有时推出的Vmax显得匪夷所思，其实是很正常的。 楼主的计算没有问题，不过0.1uM的酶浓度可能偏高，估计测得的Vmax可能偏低。。kcat可以用s-1表示422200/60=7036.666667s-1。kcat/Km=3,5183,333.33M-1* S-1.应该在合理范围。 |
8楼2013-09-13 11:13:17
2楼2013-07-04 11:47:09
qqxs
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3楼2013-07-04 12:38:00
nnxqwei
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4楼2013-07-04 19:17:35
