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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于定点突变的问题
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Crisy

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于定点突变的问题 已有1人参与

我想请教一下饱和诱变这个实验的一些问题。我PCR（20uL体系）完了直接进行DpnI 酶切3h/2次。酶切完了直接转化，3uL转200uL的感受态。全部转化，全部涂布。培养12h后长出一些转化子（每个平板的转化子差不多有五十到一百左右）。但是平板再放久一点就发现平板里会再长出了许多小小的菌来。连对照组都长了。我用的是氯霉素抗性平板。感受态验证过了，平板放了两天都没有问题。我想问下这种情况是怎么了？再长出来的是我的菌吗？我的实验步骤哪里有问题吗？
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Crisy
1楼 2014-02-24 16:32:16
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happy361

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Crisy: 金币+2 2014-02-25 12:19:11
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2014-02-26 09:21:23
DpnI酶切有可能不够彻底，可以延长酶切时间再试试。酶切不彻底的话，非突变的质粒也可以生长。
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2楼2014-02-25 11:01:50
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Crisy

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by happy361 at 2014-02-25 11:01:50
DpnI酶切有可能不够彻底，可以延长酶切时间再试试。酶切不彻底的话，非突变的质粒也可以生长。

如果是Dpn I 酶切不彻底，那对照在12h左右也应该跟实验组一样一起长出一些菌落的。我培养12h后去看只有实验组有长转化子出来，对照组没有，时间再久一点，实验组和对照组都长出密密麻麻的小菌落。
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Crisy
3楼2014-02-25 11:27:52
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