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Crisy

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于定点突变的问题 已有1人参与

我想请教一下饱和诱变这个实验的一些问题。我PCR(20uL体系)完了直接进行DpnI 酶切3h/2次。酶切完了直接转化,3uL转200uL的感受态。全部转化,全部涂布。培养12h后长出一些转化子(每个平板的转化子差不多有五十到一百左右)。但是平板再放久一点就发现平板里会再长出了许多小小的菌来。连对照组都长了。我用的是氯霉素抗性平板。感受态验证过了,平板放了两天都没有问题。我想问下这种情况是怎么了?再长出来的是我的菌吗?我的实验步骤哪里有问题吗?
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Crisy
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happy361

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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Crisy: 金币+2 2014-02-25 12:19:11
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2014-02-26 09:21:23
DpnI酶切有可能不够彻底,可以延长酶切时间再试试。酶切不彻底的话,非突变的质粒也可以生长。
2楼2014-02-25 11:01:50
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Crisy

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by happy361 at 2014-02-25 11:01:50
DpnI酶切有可能不够彻底,可以延长酶切时间再试试。酶切不彻底的话,非突变的质粒也可以生长。

如果是Dpn I 酶切不彻底,那对照在12h左右也应该跟实验组一样一起长出一些菌落的。我培养12h后去看只有实验组有长转化子出来,对照组没有,时间再久一点,实验组和对照组都长出密密麻麻的小菌落。
Crisy
3楼2014-02-25 11:27:52
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