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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 碱裂解法提取质粒时怎么减少RNA？
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574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] 碱裂解法提取质粒时怎么减少RNA？ 已有6人参与

我想利用碱裂解法提取质粒送样测序，但是RNA特别条带特别亮，不知道怎么去除或者减少RNA，对测序有没有影响
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1楼 2014-02-21 17:03:50
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shiyiyaya

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-22 21:30:58
RNA多还是会干扰测序的。办法就是提取质粒的过程中或之后加入RNase即可。
可购买粉末自己配制，也可直接购买溶液。
祝好！
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2楼2014-02-21 17:21:48
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最后溶解用TER溶解就好。
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3楼2014-02-21 21:35:21
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意孤城_

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-22 21:31:03
将去RNA酶加到溶解buffer中，4度保存。每次溶解后在37度水浴半小时效果更好。为了确保去RNA酶中没有DNA酶，建议在溶解buffer加去RNA酶之前，将去RNA酶在沸水煮10分钟。
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4楼2014-02-22 15:41:56
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-22 21:31:08
测序的话最好还是用试剂盒提取。
碱裂解法提取质粒的话，可以在最后一步溶解质粒时加入RNA酶，37℃孵育。
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5楼2014-02-22 15:52:23
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-02-22 21:31:12
用试剂盒就好啦，花不了几个钱，或者在Solution I里加RNase A

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6楼2014-02-22 16:09:00
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-02-22 21:31:20
提完质粒后加入RNA酶37度水浴一小时，再用酚氯仿抽提一下。
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hehe
7楼2014-02-22 19:25:21
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acvhreinlg

银虫 (正式写手)
加入rnase即可

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科研是将金钱转换为知识的过程，而创新则是将知识转换为金钱的过程。
8楼2014-02-22 19:41:52
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