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铁虫 (小有名气)

[求助] 碱裂解法提取质粒时怎么减少RNA? 已有6人参与

我想利用碱裂解法提取质粒送样测序,但是RNA特别条带特别亮,不知道怎么去除或者减少RNA,对测序有没有影响
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wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-22 21:31:08
测序的话最好还是用试剂盒提取。
碱裂解法提取质粒的话,可以在最后一步溶解质粒时加入RNA酶,37℃孵育。
5楼2014-02-22 15:52:23
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shiyiyaya

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-22 21:30:58
RNA多还是会干扰测序的。办法就是提取质粒的过程中或之后加入RNase即可。
可购买粉末自己配制,也可直接购买溶液。
祝好!
2楼2014-02-21 17:21:48
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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最后溶解用TER溶解就好。
3楼2014-02-21 21:35:21
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意孤城_

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-22 21:31:03
将去RNA酶加到溶解buffer中,4度保存。每次溶解后在37度水浴半小时效果更好。为了确保去RNA酶中没有DNA酶,建议在溶解buffer加去RNA酶之前,将去RNA酶在沸水煮10分钟。
4楼2014-02-22 15:41:56
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