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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)

[求助] 关于碱法提质粒时的问题

最近做碱法提质粒过程中,平衡酚被氧化了,成红色,这对所提的质粒有什么影响?琼脂糖电泳出现的拖尾是否是由这造成的?不用酚,只用氯仿异戊醇可不可以??请大家指教,谢谢~\(≧▽≦)/~啦啦啦!!!
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天: 金币+4, BioEPI+1, 鼓励回答 2012-07-20 00:42:49
蝶舞清池: 金币+20, ★★★很有帮助 2012-07-20 16:22:17
提质粒时使用酚,主要目的是变性蛋白,但酚与水有一定互溶,因此需用水饱和酚。酚如果被氧化,容易降解DNA,楼主在电泳中看到的拖尾可能与此有关,粉红色的酚不要使用了。由于氯仿本身也有变性蛋白作用,因此仅使用氯仿:异戊醇24:1也可以(我们实验室就是用这种配方),抽提蛋白效果会有一点下降。

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植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2012-07-19 22:54:35
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普通回帖

nmhsd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励回答 2012-07-20 00:42:58
酚如果氧化了,就不要用了。残留到DNA中会对下游的酶切、PCR等有较大影响。只用氯仿异戊醇当然可以。
3楼2012-07-19 22:54:39
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jl860822

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酚变红色肯定是不能用的,换吧,直接买试剂盒得了,不贵

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4楼2012-07-20 09:05:46
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castlered

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们提质粒有时候都不用酚抽提,前面溶液一二三就可以去除大部分蛋白了,要求不高的时候直接就可以用

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5楼2012-07-20 09:49:15
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-07-19 22:54:35
提质粒时使用酚,主要目的是变性蛋白,但酚与水有一定互溶,因此需用水饱和酚。酚如果被氧化,容易降解DNA,楼主在电泳中看到的拖尾可能与此有关,粉红色的酚不要使用了。由于氯仿本身也有变性蛋白作用,因此仅使用 ...

哦,了解了,谢了!!
6楼2012-07-20 16:21:42
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安必奇

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

7楼2012-07-20 16:22:47
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by nmhsd at 2012-07-19 22:54:39
酚如果氧化了,就不要用了。残留到DNA中会对下游的酶切、PCR等有较大影响。只用氯仿异戊醇当然可以。

这个,还会残留么?在下面的几步,不是可以萃取掉么?
8楼2012-07-20 16:25:25
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-20 09:05:46
酚变红色肯定是不能用的,换吧,直接买试剂盒得了,不贵

哦,谢了
9楼2012-07-20 16:25:36
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by castlered at 2012-07-20 09:49:15
我们提质粒有时候都不用酚抽提,前面溶液一二三就可以去除大部分蛋白了,要求不高的时候直接就可以用

哦,好在我们要求也不高!不过,那个蛋白多了,会不会造成拖尾啊?
10楼2012-07-20 16:27:27
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