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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于碱法提质粒时的问题
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)

[求助] 关于碱法提质粒时的问题

最近做碱法提质粒过程中，平衡酚被氧化了，成红色，这对所提的质粒有什么影响？琼脂糖电泳出现的拖尾是否是由这造成的？不用酚，只用氯仿异戊醇可不可以？？请大家指教，谢谢~\(≧▽≦)/~啦啦啦！！！
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1楼 2012-07-19 16:27:36
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回帖置顶 ( 共有1个 )

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+4, BioEPI+1, 鼓励回答 2012-07-20 00:42:49
蝶舞清池: 金币+20, ★★★很有帮助 2012-07-20 16:22:17
提质粒时使用酚，主要目的是变性蛋白，但酚与水有一定互溶，因此需用水饱和酚。酚如果被氧化，容易降解DNA，楼主在电泳中看到的拖尾可能与此有关，粉红色的酚不要使用了。由于氯仿本身也有变性蛋白作用，因此仅使用氯仿：异戊醇24:1也可以（我们实验室就是用这种配方），抽提蛋白效果会有一点下降。
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蝶舞清池
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2012-07-19 22:54:35
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普通回帖

nmhsd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励回答 2012-07-20 00:42:58
酚如果氧化了，就不要用了。残留到DNA中会对下游的酶切、PCR等有较大影响。只用氯仿异戊醇当然可以。
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3楼2012-07-19 22:54:39
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酚变红色肯定是不能用的，换吧，直接买试剂盒得了，不贵
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蝶舞清池
4楼2012-07-20 09:05:46
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castlered

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们提质粒有时候都不用酚抽提，前面溶液一二三就可以去除大部分蛋白了，要求不高的时候直接就可以用
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蝶舞清池
5楼2012-07-20 09:49:15
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-07-19 22:54:35
提质粒时使用酚，主要目的是变性蛋白，但酚与水有一定互溶，因此需用水饱和酚。酚如果被氧化，容易降解DNA，楼主在电泳中看到的拖尾可能与此有关，粉红色的酚不要使用了。由于氯仿本身也有变性蛋白作用，因此仅使用 ...

哦，了解了，谢了！！
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6楼2012-07-20 16:21:42
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安必奇

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
7楼2012-07-20 16:22:47
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by nmhsd at 2012-07-19 22:54:39
酚如果氧化了，就不要用了。残留到DNA中会对下游的酶切、PCR等有较大影响。只用氯仿异戊醇当然可以。

这个，还会残留么？在下面的几步，不是可以萃取掉么？
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8楼2012-07-20 16:25:25
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by jl860822 at 2012-07-20 09:05:46
酚变红色肯定是不能用的，换吧，直接买试剂盒得了，不贵

哦，谢了
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9楼2012-07-20 16:25:36
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by castlered at 2012-07-20 09:49:15
我们提质粒有时候都不用酚抽提，前面溶液一二三就可以去除大部分蛋白了，要求不高的时候直接就可以用

哦，好在我们要求也不高！不过，那个蛋白多了，会不会造成拖尾啊？
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10楼2012-07-20 16:27:27
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