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huangwy927

银虫 (初入文坛)

[求助] 如何设计点突变引物? 已有5人参与

有详细步骤最好!万分感谢
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
huangwy927: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-02-11 13:25:18
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-13 19:14:30
设计点突变引物除了遵循一般引物设计规则外,需要注意以下几点:1)引物长度25-45bp,以突变碱基为中心设计。2)Tm值在78左右。GC含量大于40%。
hehe
4楼2014-02-10 10:44:55
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lhs521521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-02-09 12:05:40
huangwy927: 金币+1, 有帮助 2014-02-09 16:49:31
网上都可以搜到方法的,一般我们用定点引物突变,想把哪个位点突变,直接设计一个突变引物就可以了,很方便,也做过缺失突变的,都能达到效果!
寻找真正的自我!
2楼2014-02-09 10:20:07
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huangwy927

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lhs521521 at 2014-02-09 10:20:07
网上都可以搜到方法的,一般我们用定点引物突变,想把哪个位点突变,直接设计一个突变引物就可以了,很方便,也做过缺失突变的,都能达到效果!

能举个例子嘛?定点突变引物如何设计?
3楼2014-02-09 16:20:05
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huangwy927

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-02-10 10:44:55
设计点突变引物除了遵循一般引物设计规则外,需要注意以下几点:1)引物长度25-45bp,以突变碱基为中心设计。2)Tm值在78左右。GC含量大于40%。

引物:上游 CAGTCACCCATAAAGCAGAAAGCACT
      下游 CCTAGGCACGTCAGTGGGTATTTCG
如何得知引物退火温度?以上为例
5楼2014-02-11 13:25:03
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