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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何设计点突变引物？
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huangwy927

银虫 (初入文坛)

[求助] 如何设计点突变引物？ 已有5人参与

有详细步骤最好！万分感谢
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1楼 2014-02-08 20:49:23
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
huangwy927: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-02-11 13:25:18
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-13 19:14:30
设计点突变引物除了遵循一般引物设计规则外，需要注意以下几点:1）引物长度25-45bp，以突变碱基为中心设计。2）Tm值在78左右。GC含量大于40%。
赞一下(2人) 回复此楼
hehe
4楼2014-02-10 10:44:55
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454051918

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-13 19:14:38
你可以看这个说明书来设计突变引物
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  • 附件 1 : easymutagenesissystem.pdf
    • 2014-02-13 16:52:13, 617.48 K
6楼2014-02-13 16:52:51
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454051918

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
huangwy927: 金币+2, ★有帮助 2014-03-04 10:00:37
引用回帖:
5楼: Originally posted by huangwy927 at 2014-02-11 13:25:03
引物：上游 CAGTCACCCATAAAGCAGAAAGCACT
      下游 CCTAGGCACGTCAGTGGGTATTTCG
如何得知引物退火温度？以上为例...

这个引物的退火温度是要在引物设计软件如Oligo 6或者Primer Premier 5里看的，在引物设计软件里打开目的序列，然后设计引物，然后就可以看到你设计的引物的各项参数，包括退火温度
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7楼2014-02-13 16:57:07
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lippi21

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-13 19:14:57
刚做过，直接给给网站吧！
http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi
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8楼2014-02-13 17:47:19
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

这个问题问得很搞笑，直接合成，就突变了，想怎么突变怎么突变。
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10楼2014-03-02 23:23:10
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huangwy927

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 454051918 at 2014-02-13 16:52:51
你可以看这个说明书来设计突变引物

你用的试剂盒体系是？要摸退火温度嘛？
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12楼2014-03-03 17:07:36
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普通回帖

lhs521521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-02-09 12:05:40
huangwy927: 金币+1, ★有帮助 2014-02-09 16:49:31
网上都可以搜到方法的，一般我们用定点引物突变，想把哪个位点突变，直接设计一个突变引物就可以了，很方便，也做过缺失突变的，都能达到效果！
赞一下 回复此楼
寻找真正的自我！
2楼2014-02-09 10:20:07
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huangwy927

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lhs521521 at 2014-02-09 10:20:07
网上都可以搜到方法的，一般我们用定点引物突变，想把哪个位点突变，直接设计一个突变引物就可以了，很方便，也做过缺失突变的，都能达到效果！

能举个例子嘛？定点突变引物如何设计？
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3楼2014-02-09 16:20:05
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huangwy927

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-02-10 10:44:55
设计点突变引物除了遵循一般引物设计规则外，需要注意以下几点:1）引物长度25-45bp，以突变碱基为中心设计。2）Tm值在78左右。GC含量大于40%。

引物：上游 CAGTCACCCATAAAGCAGAAAGCACT
      下游 CCTAGGCACGTCAGTGGGTATTTCG
如何得知引物退火温度？以上为例
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5楼2014-02-11 13:25:03
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huangwy927

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lippi21 at 2014-02-13 17:47:19
刚做过，直接给给网站吧！
http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi

打不开
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9楼2014-03-02 20:55:23
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