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huangwy927

银虫 (初入文坛)

[求助] 如何设计点突变引物?已有5人参与

有详细步骤最好!万分感谢
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
huangwy927: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-02-11 13:25:18
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-13 19:14:30
设计点突变引物除了遵循一般引物设计规则外,需要注意以下几点:1)引物长度25-45bp,以突变碱基为中心设计。2)Tm值在78左右。GC含量大于40%。
hehe
4楼2014-02-10 10:44:55
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454051918

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-13 19:14:38
你可以看这个说明书来设计突变引物

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  • 附件 1 : easymutagenesissystem.pdf
  • 2014-02-13 16:52:13, 617.48 K
6楼2014-02-13 16:52:51
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454051918

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
huangwy927: 金币+2, 有帮助 2014-03-04 10:00:37
引用回帖:
5楼: Originally posted by huangwy927 at 2014-02-11 13:25:03
引物:上游 CAGTCACCCATAAAGCAGAAAGCACT
      下游 CCTAGGCACGTCAGTGGGTATTTCG
如何得知引物退火温度?以上为例...

这个引物的退火温度是要在引物设计软件如Oligo 6或者Primer Premier 5里看的,在引物设计软件里打开目的序列,然后设计引物,然后就可以看到你设计的引物的各项参数,包括退火温度
7楼2014-02-13 16:57:07
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lippi21

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-13 19:14:57
刚做过,直接给给网站吧!
http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi
8楼2014-02-13 17:47:19
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

这个问题问得很搞笑,直接合成,就突变了,想怎么突变怎么突变。
10楼2014-03-02 23:23:10
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huangwy927

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 454051918 at 2014-02-13 16:52:51
你可以看这个说明书来设计突变引物

你用的试剂盒体系是?要摸退火温度嘛?
12楼2014-03-03 17:07:36
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普通回帖

lhs521521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-02-09 12:05:40
huangwy927: 金币+1, 有帮助 2014-02-09 16:49:31
网上都可以搜到方法的,一般我们用定点引物突变,想把哪个位点突变,直接设计一个突变引物就可以了,很方便,也做过缺失突变的,都能达到效果!
寻找真正的自我!
2楼2014-02-09 10:20:07
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huangwy927

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lhs521521 at 2014-02-09 10:20:07
网上都可以搜到方法的,一般我们用定点引物突变,想把哪个位点突变,直接设计一个突变引物就可以了,很方便,也做过缺失突变的,都能达到效果!

能举个例子嘛?定点突变引物如何设计?
3楼2014-02-09 16:20:05
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huangwy927

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-02-10 10:44:55
设计点突变引物除了遵循一般引物设计规则外,需要注意以下几点:1)引物长度25-45bp,以突变碱基为中心设计。2)Tm值在78左右。GC含量大于40%。

引物:上游 CAGTCACCCATAAAGCAGAAAGCACT
      下游 CCTAGGCACGTCAGTGGGTATTTCG
如何得知引物退火温度?以上为例
5楼2014-02-11 13:25:03
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huangwy927

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by lippi21 at 2014-02-13 17:47:19
刚做过,直接给给网站吧!
http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi

打不开
9楼2014-03-02 20:55:23
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