24小时热门版块排行榜    

查看: 1974  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wzp9012

铁虫 (著名写手)

[求助] 求助酶的镍柱纯化 已有3人参与

小弟最近在做酶学性质,但一直卡在镍柱纯化这一块,先前是蛋白挂不上去,听各位师兄师姐的建议调低咪挫之后,蛋白挂上去了,后来用咪挫洗,跑电泳,除目的蛋白外还有少量的杂蛋白,最近一次跑交发现里面杂蛋白好多,简直就是原蛋白稀释后的,完全没有纯化出来。想请教师兄师姐,纯化出来的只有目的蛋白的一条带的是怎么弄得,谢谢。(小弟先前是这样的,上样:1mmol/l,平衡液10mmol/l,洗脱500mmol/l)
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biology-girl

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by Allen206 at 2014-01-17 15:29:42
上样缓冲液里面不能有咪唑,洗脱的时候拉一个长梯度,然后透析,过离子柱子,减少非特异性吸附就那些办法,木虫里面有资料,加入去污剂,盐浓度,甘油,没别的了,

上样缓冲液里 不能有咪唑? 没有咪唑不是挂不上镍柱吗?
9楼2014-06-16 09:41:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-17 12:49:27
我一般用的咪挫是equilibration 5mM, wash 20 mM, elution 250 mM. 我假定你说的平衡液就是指wash buffer
你这个浓度应该没问题,但是不仅仅是浓度,还有你一般用多少体积来。如果洗的体积过多,蛋白就都洗没了;洗的体积太少,还有杂质。对于10ml的镍柱,我一般不会用超过50ml wash buffer.
实在纯化不出来就用钴柱吧,比镍柱贵,但是特异性好很多
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2014-01-16 23:39:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heylixing

铁虫 (正式写手)

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-17 12:49:31
买点氯化钴,把镍脱下来,换成钴。我觉得这个蛋白可以过其他柱,干嘛非要过镍柱,有时候镍柱就这种纯化效果。
3楼2014-01-16 23:54:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Allen206

银虫 (小有名气)

什么系统出来的蛋白?埃希氏么?有没有标签,序列性质都知道么?
不想说什么,,,,
4楼2014-01-17 12:53:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 274求调剂 +13 顾九笙要谦虚 2026-03-24 19/950 2026-03-26 13:30 by 小小麦片
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分,求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 321求调剂 +3 璞玉~~ 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:07 by Zhanglab-TJU
[考研] 311求调剂 +4 勇敢的小吴 2026-03-20 4/200 2026-03-25 18:12 by xcjcqu
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +7 holy J 2026-03-21 7/350 2026-03-24 17:24 by xiaohai104
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:11 by macy2011
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 一志愿南大,0703化学,分数336,求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
信息提示
请填处理意见