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jpwan123

新虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR实验中,要获得双链cDNA时,需不需要去除混合的RNA? 已有4人参与

请各路好汉帮忙:在全长一链cDNA合成后,要获得双链cDNA,需不需要用RNaseH或RNaseA处理去除一链cDNA中混合的RNA?请求帮助,谢谢啊
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-25 11:44:43
需要,第一链合成形成mRNA-cDNA复合体,第二链合成只需要单链cDNA。要用RNA酶把mRNA水解掉,然后DNA聚合酶才能结合到模板上,聚合生成DNA。
hehe
3楼2014-01-15 21:03:16
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-01-25 11:44:38
不需要,直接进行PCR即可
借你一生好不好
2楼2014-01-15 20:48:01
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-25 11:44:49
通常的逆转录酶可以降解RNA-DNA双链中的RNA。
4楼2014-01-24 09:23:26
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不需要,RT肯定是用的试剂盒吧,说明书肯定有明确的步骤吧。

产物可以直接用于PCR。

而且这样的问题,得到了RT-PCR产物跑个PCR不就知道结果了,在这儿问了等回复等到什么时候,别人回复了还要再筛选考虑。直接一个实验就能知道你问题的答案了。做实验不要每一步都小心翼翼,大胆往前走就好。
5楼2014-01-26 12:34:18
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