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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RT-PCR实验中，要获得双链cDNA时，需不需要去除混合的RNA？
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jpwan123

新虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR实验中，要获得双链cDNA时，需不需要去除混合的RNA？已有4人参与

请各路好汉帮忙：在全长一链cDNA合成后，要获得双链cDNA，需不需要用RNaseH或RNaseA处理去除一链cDNA中混合的RNA？请求帮助，谢谢啊
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1楼2014-01-15 17:42:14
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-01-25 11:44:38
不需要，直接进行PCR即可
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借你一生好不好
2楼2014-01-15 20:48:01
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-25 11:44:43
需要，第一链合成形成mRNA-cDNA复合体，第二链合成只需要单链cDNA。要用RNA酶把mRNA水解掉，然后DNA聚合酶才能结合到模板上，聚合生成DNA。
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hehe
3楼2014-01-15 21:03:16
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-25 11:44:49
通常的逆转录酶可以降解RNA-DNA双链中的RNA。
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4楼2014-01-24 09:23:26
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不需要，RT肯定是用的试剂盒吧，说明书肯定有明确的步骤吧。

产物可以直接用于PCR。

而且这样的问题，得到了RT-PCR产物跑个PCR不就知道结果了，在这儿问了等回复等到什么时候，别人回复了还要再筛选考虑。直接一个实验就能知道你问题的答案了。做实验不要每一步都小心翼翼，大胆往前走就好。
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5楼2014-01-26 12:34:18
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