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taipin345

铜虫 (小有名气)

[求助] 胰蛋白酶水解蛋白水解度很低 已有5人参与

小弟最近在做微波辅助胰蛋白酶水解蛋白的实验,发现水解度很低,一直上不去,试过提高温度和pH的方法。可是水解度依然很低,而且随着pH的增加水解度竟然也提高了,到了pH10的水解度竟然比8的还要高很多,这是怎么回事呢?不是文献上说胰蛋白酶的最适pH在8左右吗?
我才用的是pH-Stat方法测定水解度,如果我想做一个分步水解的酶解,用什么方法测定水解度比较好呢?
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taipin345

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoyukong at 2013-12-27 08:46:09
换几种测定水解度的方法吧,发现几种水解度的方法显示的结果不一致。还有是否一定选择胰蛋白酶作用?

嗯,方法的话选什么比较容易测定呢?甲醛滴定?茚三酮显色?

嗯  不一定非要选择胰蛋白酶。别的蛋白酶也在做,就是这个一直效果不好
3楼2013-12-27 12:55:30
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xiaoyukong

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换几种测定水解度的方法吧,发现几种水解度的方法显示的结果不一致。还有是否一定选择胰蛋白酶作用?
2楼2013-12-27 08:46:09
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zybpxy

铁杆木虫 (著名写手)

致斋大人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你不用微博只用胰蛋白酶在最适pH试试看,是不是微博功率过高抑制酶活
走的太远,别忘了为何出发
4楼2013-12-27 15:04:37
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taipin345

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zybpxy at 2013-12-27 15:04:37
你不用微博只用胰蛋白酶在最适pH试试看,是不是微博功率过高抑制酶活

嗯,我也试过,发现还是很低,我把底物浓度,E/S比,pH,温度都试过了,还是很低。
5楼2013-12-27 16:33:03
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