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柠檬可乐星

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[交流] 测序结果找不到引物

各位大神：我是做系统发育的，新手一枚，之前测了几个种的18S片段，大约1000bp，双向测序，是克隆后测序的。结果有一些能从测序结果中找到上游和下游引物，但大部分只能找到上游或者下游引物，有的甚至上游和下游都找不到。但是在NCBI里blast，能确定这些是我做的属的。在网上看到不同的说法，有的说找不到引物说明没测通，有的说找不到引物属于正常，因为开头一二十个碱基经常测不准。所以我有三个疑问：
1、到底应该怎么看待测序结果中找不到引物序列这个问题？
2、这些序列可以用吗？
3、只看NCBI里blast的结果可靠吗？

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1楼 2013-12-25 14:11:10

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huahu3600

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kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-12-26 08:33:18

1，测序结果里面找不到该反应的测序引物是正常的
2，序列只要峰图正常就可以用，不过，一般头尾都会有杂峰等等
3，可靠的，

另外，给你个建议，可以用载体上的通用引物测序，这样，你整个片段的序列都可以看到了。

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2楼2013-12-25 15:10:01

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柠檬可乐星

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引用回帖:

2楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-12-25 15:10:01
1，测序结果里面找不到该反应的测序引物是正常的
2，序列只要峰图正常就可以用，不过，一般头尾都会有杂峰等等
3，可靠的，

另外，给你个建议，可以用载体上的通用引物测序，这样，你整个片段的序列都可以看到 ...

感谢您的指点，有一点忘记说了，我测序是用的通用引物，如果这样还找不到我自己的引物序列，是不是就不正常了呢？

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3楼2013-12-25 15:31:50

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