24小时热门版块排行榜    

查看: 2757  |  回复: 2
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zdb123

银虫 (初入文坛)

[求助] 原生质体制备时如何过滤酶液,如何收集原生质体 已有2人参与

最近在做大麦糊粉层的原生质体,遇到了很多的麻烦:
        首先纤维素酶不溶解,用了CPW缓冲液,乙酸 缓冲液等等都不行;
        第二,制备不了球形的原生质体,在显微镜观察都是絮状的;
        第三,不知道怎么过滤掉酶液;
        第四,如何收集原生质体,我按照一些文献上方法,在10目的尼龙网上过滤,然后在用洗涤液在尼龙网上冲洗,收集细胞,我发现这过程中,收集率很低,而且原生质体的密度液非常低。
     还望各位大神不惜赐教,由衷的万分感激。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

知行合一
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzhwin

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zdb123: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-19 08:15:01
引用回帖:
2楼: Originally posted by 十比 at 2013-12-17 05:04:24
酶液在55度左右加热10分钟,然后用转子转几下很快会溶,收集用50-100um小孔的的小滤网(BD公司)过滤就行。你可以看看Jean Sheen的网站,上面有做拟南芥原生质的详细信息。

补充一下:纤维素酶在PH5.7的MES溶液里转子搅拌几分钟就可以溶解,这个时候是浑浊的,55度水浴10分钟后会变得澄清,酶液要用0.22微米的针头滤器过滤一下否则制备出来的原生质体容易涨菌。

最后:楼上是我们实验室老大,老大威武!
3楼2013-12-17 11:18:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答

十比

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-17 09:55:51
zdb123: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-19 08:14:50
zdb123: 金币+5 2013-12-19 08:15:14
酶液在55度左右加热10分钟,然后用转子转几下很快会溶,收集用50-100um小孔的的小滤网(BD公司)过滤就行。你可以看看Jean Sheen的网站,上面有做拟南芥原生质的详细信息。
2楼2013-12-17 05:04:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-30 03:26 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 3/150 2026-08-30 02:29 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:58 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:49 by ZPa0EcMwuECS
[博后之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:47 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:34 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:25 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 01:03 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 00:53 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 00:52 by ZPa0EcMwuECS
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +9 苏东坡二世 2026-08-23 9/450 2026-08-29 14:41 by hustersqt
[基金申请] 基金不中,共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
信息提示
请填处理意见