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胡顿吉

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于黑曲霉培养及制备原生质体的疑问 已有2人参与

各位微生物的大神们,现在有几个问题想请教大家:
一、黑曲霉转接过一次的斜面(第一代),用50%甘油刮取菌体制备甘油管,将此甘油管中的菌转接涂布到PDA平板上,培养16-18h,菌正常生长(第二代)。再将此菌(第二代)用50%甘油刮取菌丝体制备甘油管,从该甘油管中接的菌涂布到PDA平板上(含玻璃纸),培养16-18h后,一个平板只长出零星几个单菌落(第三代),而不是菌平铺生长,已重复了几次试验,均为此现象。
二、想请教一下工业黑曲霉在生长过程中颜色的变化。
三、黑曲霉原生质体的制备有什么经验,望交流。
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任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2013-08-09 20:27:11
找找两次转接的区别。你第一次转接没放玻璃纸吗? 没放的话应该就是玻璃纸的问题。一般黑曲霉一长一片。原生质体制备的话没有黑曲霉的相关文献吗? 我的是个以前做过丝状真菌的,用蜗牛酶酶解破壁做原生质体。
微生物行业的初学者,望大牛们不吝赐教
2楼2013-08-09 16:16:41
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胡顿吉

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 任_强 at 2013-08-09 16:16:41
找找两次转接的区别。你第一次转接没放玻璃纸吗? 没放的话应该就是玻璃纸的问题。一般黑曲霉一长一片。原生质体制备的话没有黑曲霉的相关文献吗? 我的是个以前做过丝状真菌的,用蜗牛酶酶解破壁做原生质体。

第一次转接放了玻璃纸,接了好几个板,其中一个板刮下来保甘油管,其他的用来做原生质体。玻璃纸是灭过菌的,问题会出在哪呢?纠结中
3楼2013-08-09 16:27:57
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任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 胡顿吉 at 2013-08-09 16:27:57
第一次转接放了玻璃纸,接了好几个板,其中一个板刮下来保甘油管,其他的用来做原生质体。玻璃纸是灭过菌的,问题会出在哪呢?纠结中...

具体情况不大好分析,你再好好看看哪个步骤出了错。我们一般保存甘油管用20%的甘油。错误的方法加错误的方向,不管你重复多少次都是错误的。好好看看每个细节吧。
微生物行业的初学者,望大牛们不吝赐教
4楼2013-08-09 16:44:17
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787460977

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励热心交流! 2013-10-08 23:58:03
你的黑曲霉菌株是工业菌株吗?如果是,不太适合玻璃纸培养,我做的就是黑曲霉工业菌株,用玻璃纸培养不可以,因为菌株有好多气生菌丝,所以菌丝不匍匐,我们就用液体培养收集菌体在制备原生质体,效果不错。工业菌株不好制备,需要很长时间摸索,加油吧,亲!
还有我们是用生理盐水洗脱孢子,进行传代转接,怎么会用甘油管呢?你可以试试用生理盐水洗脱孢子,看传代有没有影响。
5楼2013-10-08 16:55:27
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anna_min

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 胡顿吉 at 2013-08-09 16:27:57
第一次转接放了玻璃纸,接了好几个板,其中一个板刮下来保甘油管,其他的用来做原生质体。玻璃纸是灭过菌的,问题会出在哪呢?纠结中...

您好   请问您使用的玻璃纸是从哪里购买的呢 ?
追求
6楼2014-02-16 23:08:34
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plumplumgxc

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

奇怪,为什么用甘油呢。制备原生质体用液体培养比较好
科研这条道不好走啊。。。
7楼2014-02-18 16:19:12
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俊俊思密达

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 787460977 at 2013-10-08 16:55:27
你的黑曲霉菌株是工业菌株吗?如果是,不太适合玻璃纸培养,我做的就是黑曲霉工业菌株,用玻璃纸培养不可以,因为菌株有好多气生菌丝,所以菌丝不匍匐,我们就用液体培养收集菌体在制备原生质体,效果不错。工业菌株 ...

你好,我想请问一下活化菌丝的培养基是什么

发自小木虫IOS客户端
8楼2018-04-24 13:07:38
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俊俊思密达

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 俊俊思密达 at 2018-04-24 13:07:38
你好,我想请问一下活化菌丝的培养基是什么
...

因为我用了不同的培养基接菌。只有YPD生长快且菌球小,可是和别的黑曲霉生长出的球相比还是偏大,所以原生质体制不出来

发自小木虫IOS客户端
9楼2018-04-24 13:09:56
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