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acnotlove

银虫 (小有名气)

[求助] 原生质体单核化问题 急求!!!!!

我做的是真姬菇的原生质体制备,准备原生质体再生后挑取单核菌株~

在制备过程中都在无菌条件下操作,用的是0.6M的甘露醇做稳渗剂,2%溶壁酶,再生培养基选用:麦芽糖0.5% 酵母0.5% 葡萄糖1% 甘露醇0.6M 琼脂2% 这次破壁时间大约三个多小时,才三天就长出这些小点点了,点看去很弱,怎么回事,我看文献都说原生质体的再生培养要将近一周的时间,芒状的吗,可是我这才三天就长了,这个是原生质体呢还是孢子,或是菌丝? 哪位大侠高手给我指点一下吧,万分感谢诶!!!!!!!
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niuniu1973

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-08-13 21:31:30
原生质体制备时镜检了吗,过滤去除菌丝了吗,可将过滤后的原生质体用SDS处理,接种于再生培养基上与不经SDS处理相比较,SDS处理后原生质体破裂,不能生长;也可将原生质体接种于非高渗的普通培养基上,与再生培养基上生长状况比较,如果在普通培养基上也生长,则有菌丝体存在。
2楼2011-08-13 13:41:50
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acnotlove

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by niuniu1973 at 2011-08-13 13:41:50:
原生质体制备时镜检了吗,过滤去除菌丝了吗,可将过滤后的原生质体用SDS处理,接种于再生培养基上与不经SDS处理相比较,SDS处理后原生质体破裂,不能生长;也可将原生质体接种于非高渗的普通培养基上,与再生培养 ...

镜检了,有看到原生质体,但没有用SDS处理,我是用稳渗剂洗两遍后用再生液体培养基洗一遍,然后在加入再生液体培养基后静置30分钟后去一毫升稀释后涂平板的
没有进行对照处理~
3楼2011-08-15 12:49:29
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niuniu1973

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

做个对照吧,你就知道了是不是菌丝的污染了,任何时候实验中的对照都很重要,
4楼2011-08-16 13:40:15
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