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胡顿吉

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于黑曲霉培养及制备原生质体的疑问 已有2人参与

各位微生物的大神们，现在有几个问题想请教大家：
一、黑曲霉转接过一次的斜面（第一代），用50%甘油刮取菌体制备甘油管，将此甘油管中的菌转接涂布到PDA平板上，培养16-18h,菌正常生长（第二代）。再将此菌（第二代）用50%甘油刮取菌丝体制备甘油管，从该甘油管中接的菌涂布到PDA平板上（含玻璃纸），培养16-18h后，一个平板只长出零星几个单菌落（第三代），而不是菌平铺生长，已重复了几次试验，均为此现象。
二、想请教一下工业黑曲霉在生长过程中颜色的变化。
三、黑曲霉原生质体的制备有什么经验，望交流。
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1楼 2013-08-09 16:00:11
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任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 胡顿吉 at 2013-08-09 16:27:57
第一次转接放了玻璃纸，接了好几个板，其中一个板刮下来保甘油管，其他的用来做原生质体。玻璃纸是灭过菌的，问题会出在哪呢？纠结中...

具体情况不大好分析，你再好好看看哪个步骤出了错。我们一般保存甘油管用20%的甘油。错误的方法加错误的方向，不管你重复多少次都是错误的。好好看看每个细节吧。
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微生物行业的初学者，望大牛们不吝赐教
4楼2013-08-09 16:44:17
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任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-08-09 20:27:11
找找两次转接的区别。你第一次转接没放玻璃纸吗？ 没放的话应该就是玻璃纸的问题。一般黑曲霉一长一片。原生质体制备的话没有黑曲霉的相关文献吗？ 我的是个以前做过丝状真菌的，用蜗牛酶酶解破壁做原生质体。
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微生物行业的初学者，望大牛们不吝赐教
2楼2013-08-09 16:16:41
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胡顿吉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 任_强 at 2013-08-09 16:16:41
找找两次转接的区别。你第一次转接没放玻璃纸吗？ 没放的话应该就是玻璃纸的问题。一般黑曲霉一长一片。原生质体制备的话没有黑曲霉的相关文献吗？ 我的是个以前做过丝状真菌的，用蜗牛酶酶解破壁做原生质体。

第一次转接放了玻璃纸，接了好几个板，其中一个板刮下来保甘油管，其他的用来做原生质体。玻璃纸是灭过菌的，问题会出在哪呢？纠结中
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3楼2013-08-09 16:27:57
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787460977

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励热心交流！ 2013-10-08 23:58:03
你的黑曲霉菌株是工业菌株吗？如果是，不太适合玻璃纸培养，我做的就是黑曲霉工业菌株，用玻璃纸培养不可以，因为菌株有好多气生菌丝，所以菌丝不匍匐，我们就用液体培养收集菌体在制备原生质体，效果不错。工业菌株不好制备，需要很长时间摸索，加油吧，亲！
还有我们是用生理盐水洗脱孢子，进行传代转接，怎么会用甘油管呢？你可以试试用生理盐水洗脱孢子，看传代有没有影响。
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5楼2013-10-08 16:55:27
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