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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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muyuan

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 原生质体转化

有虫友做过PEG介导的原生质体转化吗，为什么我在转化后加溶液终止转染之后再离心，不见原生质体沉淀了呢？谁能帮我分析分析原因，在做转化之前在显微镜下观察过原生质体，得到的原生质体蛮正常的
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qyf0904

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1楼 2011-04-19 15:08:25
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新人小玥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2, EPI+1): 鼓励发帖应助。 2011-04-19 19:49:55
不知道你做的是什么物种。
就我的经验而言，如果原生质体比较小的话，就很难收集。
我有三个办法解决：
1、加大原生质体的量，就是加MMG溶液的时候就增加原生质体浓度，这对转化效率有一定的影响，要找好之间的平衡点。
2、终止反应时加多点W5溶液，使PEG浓度更稀，原生质体容易沉。
3、延长离心的时间，也可以稍微加点转速，但是不要多，原生质体容易破。
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2楼2011-04-19 19:27:50
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muyuan

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 新人小玥 at 2011-04-19 19:27:50:
不知道你做的是什么物种。
就我的经验而言，如果原生质体比较小的话，就很难收集。
我有三个办法解决：
1、加大原生质体的量，就是加MMG溶液的时候就增加原生质体浓度，这对转化效率有一定的影响，要找好之间的 ...

谢谢建议，可是你没应助，想给你发金币发不了了
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3楼2011-04-20 13:02:28
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zwlr116812

金虫 (正式写手)
能不能请教一下你具体的原生质体的方法及所用溶液
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4楼2011-04-21 10:44:00
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muyuan

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zwlr116812 at 2011-04-21 10:44:00:
能不能请教一下你具体的原生质体的方法及所用溶液

参照Arabidopsis mesophyll protoplasts: a versatile cell system for transient gene expression analysis
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5楼2011-04-21 13:46:34
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无语东流

新虫 (初入文坛)
我做水稻原生质体转化，之前做的挺好的。不过最近突然出问题了：原生质体抽提的还行，但是confical观察时看不到任何荧光，对照和MARKER也没有。试剂重新配了，质粒也重新提了，但还是不行，请高人指点
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6楼2012-08-06 23:58:35
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qyf0904

新虫 (小有名气)
送红花一朵
请问mmg 溶液W5溶液是什么？我最近在做原生质体转化，但是原生质体损失严重，不知道什么原因，PEG的介导法，PEG聚合度对转化有影响吗？
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7楼2013-11-25 12:36:07
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zbl217

新虫 (初入文坛)
请教一下，你是怎么鉴定原生质体活性是否正常，
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8楼2015-05-20 17:05:33
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