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muyuan

铁杆木虫 (著名写手)

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[求助] 原生质体转化

有虫友做过PEG介导的原生质体转化吗，为什么我在转化后加溶液终止转染之后再离心，不见原生质体沉淀了呢？谁能帮我分析分析原因，在做转化之前在显微镜下观察过原生质体，得到的原生质体蛮正常的

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1楼 2011-04-19 15:08:25

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新人小玥

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2, EPI+1): 鼓励发帖应助。 2011-04-19 19:49:55

不知道你做的是什么物种。
就我的经验而言，如果原生质体比较小的话，就很难收集。
我有三个办法解决：
1、加大原生质体的量，就是加MMG溶液的时候就增加原生质体浓度，这对转化效率有一定的影响，要找好之间的平衡点。
2、终止反应时加多点W5溶液，使PEG浓度更稀，原生质体容易沉。
3、延长离心的时间，也可以稍微加点转速，但是不要多，原生质体容易破。

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2楼2011-04-19 19:27:50

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muyuan

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引用回帖:

Originally posted by 新人小玥 at 2011-04-19 19:27:50:
不知道你做的是什么物种。
就我的经验而言，如果原生质体比较小的话，就很难收集。
我有三个办法解决：
1、加大原生质体的量，就是加MMG溶液的时候就增加原生质体浓度，这对转化效率有一定的影响，要找好之间的 ...

谢谢建议，可是你没应助，想给你发金币发不了了

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3楼2011-04-20 13:02:28

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