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二月客

铁杆木虫 (职业作家)


[交流] 酵母原生质体的生成

我最近做酵母的原生质体的生成,用的是柠檬酸-磷酸氢二钾缓冲体系,pH 6点多一点,我用巯基乙醇处理后,离心,然后直接用蜗牛酶处理,破壁后,用缓冲液洗涤后,就稀释一定倍数,涂布于YPD(不是高渗YPD培养基)上,计算原生体生成率,以没有处理的为原始的对照,结果生成的原生质体量都很少或者几乎没有生成原生质体,请问大侠是怎么回事?酵母为热带假丝酵母和酿酒酵母,蜗牛酶是从上海生工订的,酶量用到了10%都无效。谢谢大侠们指导。
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xiuqyang

金虫 (小有名气)



二月客(金币+1): 谢谢参与
我想你在消化过程中,应该做个镜检,原生质体是球形,很容易看到的,间隔取样看俺,在找找原因
2楼2013-11-12 08:36:01
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茅塞顿开

至尊木虫 (文坛精英)



二月客(金币+1): 谢谢参与
顶起
3楼2013-11-12 08:49:31
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lhx00555

至尊木虫 (文坛精英)



二月客(金币+1): 谢谢参与
zhufu
5楼2013-11-12 09:16:26
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trimmy

木虫 (职业作家)



二月客(金币+1): 谢谢参与
路过

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
9楼2013-11-12 10:11:33
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芍药笼烟

铁杆木虫 (职业作家)



二月客(金币+1): 谢谢参与
祝楼主一切顺利,家人健康快乐,爱人开心幸福!
16楼2013-11-12 11:00:24
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1921952610

铁虫 (正式写手)



二月客(金币+1): 谢谢参与
你查查文献。似乎还要加纤维素酶。你查查看。我记得不是很清楚。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
18楼2013-11-12 14:20:23
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gitme3388

铁虫 (知名作家)



二月客(金币+1): 谢谢参与
愿楼主心想事成
20楼2013-11-12 15:05:59
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)



二月客(金币+1): 谢谢参与
blessing
23楼2013-11-12 16:06:21
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muchfan

木虫 (知名作家)



二月客(金币+1): 谢谢参与
Good luck
25楼2013-11-12 16:22:20
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lastpython

木虫 (职业作家)



二月客(金币+1): 谢谢参与
Good luck
26楼2013-11-12 16:22:23
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heibi

金虫 (文坛精英)



二月客(金币+1): 谢谢参与
愿楼主心想事成
27楼2013-11-12 16:22:27
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shin_ichi

新虫 (初入文坛)



二月客(金币+1): 谢谢参与
酵母不太懂,我做丝状真菌用溶壁酶
28楼2013-11-12 22:35:35
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fakebook

木虫 (文坛精英)



二月客(金币+1): 谢谢参与
Good luck
34楼2013-11-13 00:22:22
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checkin

银虫 (知名作家)



二月客(金币+1): 谢谢参与
Best wishes
35楼2013-11-13 00:25:38
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niu.bi

木虫 (文坛精英)



二月客(金币+1): 谢谢参与
祝福楼主
36楼2013-11-13 04:23:19
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herome

金虫 (知名作家)



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深深祝福
42楼2013-11-13 08:19:09
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wzx6174

铁虫 (初入文坛)



二月客(金币+1): 谢谢参与
建议不要用缓冲液洗破壁后的原生质体了,原生质体太容易破了,可以试试浓度稍高一点点的生理盐水,还有要注意酶解的时间,建议对时间做一个梯度优化,隔一定时间做一个镜鉴,还有,你的酶浓太高了吧,我做丝状真菌的,用的是混合酶系,你也可以试试,我酶浓才3%-5%
45楼2013-11-13 10:51:32
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userhung4楼
2013-11-12 09:06   回复  
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wlxiao6楼
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假大空7楼
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haixiawu8楼
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dlbrians10楼
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