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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 酵母原生质体的生成
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二月客

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] 酵母原生质体的生成

我最近做酵母的原生质体的生成，用的是柠檬酸-磷酸氢二钾缓冲体系，pH 6点多一点，我用巯基乙醇处理后，离心，然后直接用蜗牛酶处理，破壁后，用缓冲液洗涤后，就稀释一定倍数，涂布于YPD（不是高渗YPD培养基）上，计算原生体生成率，以没有处理的为原始的对照，结果生成的原生质体量都很少或者几乎没有生成原生质体，请问大侠是怎么回事？酵母为热带假丝酵母和酿酒酵母，蜗牛酶是从上海生工订的，酶量用到了10%都无效。谢谢大侠们指导。
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1楼 2013-11-11 09:57:40
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wzx6174

铁虫 (初入文坛)
★
二月客(金币+1): 谢谢参与
建议不要用缓冲液洗破壁后的原生质体了，原生质体太容易破了，可以试试浓度稍高一点点的生理盐水，还有要注意酶解的时间，建议对时间做一个梯度优化，隔一定时间做一个镜鉴，还有，你的酶浓太高了吧，我做丝状真菌的，用的是混合酶系，你也可以试试，我酶浓才3%-5%
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45楼2013-11-13 10:51:32
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xiuqyang

金虫 (小有名气)
★
二月客(金币+1): 谢谢参与
我想你在消化过程中，应该做个镜检，原生质体是球形，很容易看到的，间隔取样看俺，在找找原因
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2楼2013-11-12 08:36:01
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trimmy

木虫 (职业作家)
★
二月客(金币+1): 谢谢参与
路过

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2013-11-12 10:11:33
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