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二月客

铁杆木虫 (职业作家)


[交流] 酵母原生质体的生成

我最近做酵母的原生质体的生成,用的是柠檬酸-磷酸氢二钾缓冲体系,pH 6点多一点,我用巯基乙醇处理后,离心,然后直接用蜗牛酶处理,破壁后,用缓冲液洗涤后,就稀释一定倍数,涂布于YPD(不是高渗YPD培养基)上,计算原生体生成率,以没有处理的为原始的对照,结果生成的原生质体量都很少或者几乎没有生成原生质体,请问大侠是怎么回事?酵母为热带假丝酵母和酿酒酵母,蜗牛酶是从上海生工订的,酶量用到了10%都无效。谢谢大侠们指导。
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wzx6174

铁虫 (初入文坛)



二月客(金币+1): 谢谢参与
建议不要用缓冲液洗破壁后的原生质体了,原生质体太容易破了,可以试试浓度稍高一点点的生理盐水,还有要注意酶解的时间,建议对时间做一个梯度优化,隔一定时间做一个镜鉴,还有,你的酶浓太高了吧,我做丝状真菌的,用的是混合酶系,你也可以试试,我酶浓才3%-5%
45楼2013-11-13 10:51:32
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xiuqyang

金虫 (小有名气)



二月客(金币+1): 谢谢参与
我想你在消化过程中,应该做个镜检,原生质体是球形,很容易看到的,间隔取样看俺,在找找原因
2楼2013-11-12 08:36:01
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trimmy

木虫 (职业作家)



二月客(金币+1): 谢谢参与
路过

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
9楼2013-11-12 10:11:33
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