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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 拟南芥 原生质体
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郑成志

金虫 (正式写手)

[求助] 拟南芥 原生质体

我想制备拟南芥原生质体。首先，我种植拟南芥（野生型），是用蛭石直接种植的，浇营养液。文献报道做原生质体所用3-4周龄的叶片，我种了两批拟南芥，长了20天叶子还很小，只有两片，就开始枯萎。我想问下有人知道3-4周龄拟南芥叶片用来做原生质体时叶子有多大吗？我见过同学做转化的叶片大概有拇指大，所以想知道做原生质体的嫩叶有多大，如果和我现在长得差不多，我就直接拿来做原生质体了，小点没关系，加大量就可以。谢谢大家！
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1楼 2011-09-26 21:00:45
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豆豆鱼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
郑成志(金币+8): 谢谢你的应助，先给8个金币，希望不嫌少，那么你的叶片大概有多大了，我的的确种的不好，还是拿来试着做原生质体，毕竟很嫩。 2011-09-27 09:15:09
jhu132llh(金币+2): good,鼓励热心虫友积极应助 2011-09-30 16:31:52
3-4周应该能用了，但看你说的貌似长的不是很好，制备原生质体用的一般是第3-5片真叶，最好不要让它抽苔开花，那样就过了。叶片大小，我们用的没有拇指那么大。
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2楼2011-09-26 23:03:38
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liucaifeng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
郑成志(金币+5): 谢谢建议，我怕种在土里相比于蛭石容易烂根，我会再考虑的，谢谢！ 2011-09-30 09:17:23
jhu132llh(金币+2): good,鼓励热心虫友积极应助 2011-09-30 16:31:42
直接种在土里应该会更好，我的四周左右短日照能长到六七片叶子吧，没有拇指那么大，但也不小了。原生质体制备材料很关键，要选长得好的，没有受到胁迫的，听你的描述，感觉你的材料估计不大好
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3楼2011-09-29 13:33:24
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xiemin217

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
郑成志(金币+5): 谢谢你的建议，因为以前没种过，总担心蛭石提供不了营养，我会试试的。 2011-09-30 09:16:33
jhu132llh(金币+5): good,鼓励新虫积极应助 2011-09-30 16:31:30
1.好好看下J SHEEN的方法，上面说的很清楚的，照做一两次就就可以得到很好的原生质体了。
2.拟南芥是你中的不好，主要是光和水，你第二片叶子就死，那是收到胁迫了。建议：放在12H光照条件下养，不要叫营养液，直接交清水，最好是去离水。
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4楼2011-09-30 08:35:03
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mycqu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
jhu132llh(金币+3): good,感谢应助 2011-10-04 17:35:32
分离原生质的幼苗不宜土培，无菌苗更好些，当然酶解液也要无菌。建议14小时短日照培养，3-4周抽薹前为佳，叶片的大小视你培养的好坏有差别，此外分离前一天可以4度处理1天，将有效提高活力。
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5楼2011-10-03 16:13:20
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