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郑成志

金虫 (正式写手)


[求助] 拟南芥 原生质体

我想制备拟南芥原生质体。首先,我种植拟南芥(野生型),是用蛭石直接种植的,浇营养液。文献报道做原生质体所用3-4周龄的叶片,我种了两批拟南芥,长了20天叶子还很小,只有两片,就开始枯萎。我想问下有人知道3-4周龄拟南芥叶片用来做原生质体时叶子有多大吗?我见过同学做转化的叶片大概有拇指大,所以想知道做原生质体的嫩叶有多大,如果和我现在长得差不多,我就直接拿来做原生质体了,小点没关系,加大量就可以。谢谢大家!
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豆豆鱼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
郑成志(金币+8): 谢谢你的应助,先给8个金币,希望不嫌少,那么你的叶片大概有多大了,我的的确种的不好,还是拿来试着做原生质体,毕竟很嫩。 2011-09-27 09:15:09
jhu132llh(金币+2): good,鼓励热心虫友积极应助 2011-09-30 16:31:52
3-4周应该能用了,但看你说的貌似长的不是很好,制备原生质体用的一般是第3-5片真叶,最好不要让它抽苔开花,那样就过了。叶片大小,我们用的没有拇指那么大。
2楼2011-09-26 23:03:38
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liucaifeng

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
郑成志(金币+5): 谢谢建议,我怕种在土里相比于蛭石容易烂根,我会再考虑的,谢谢! 2011-09-30 09:17:23
jhu132llh(金币+2): good,鼓励热心虫友积极应助 2011-09-30 16:31:42
直接种在土里应该会更好,我的四周左右短日照能长到六七片叶子吧,没有拇指那么大,但也不小了。原生质体制备材料很关键,要选长得好的,没有受到胁迫的,听你的描述,感觉你的材料估计不大好
3楼2011-09-29 13:33:24
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xiemin217

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
郑成志(金币+5): 谢谢你的建议,因为以前没种过,总担心蛭石提供不了营养,我会试试的。 2011-09-30 09:16:33
jhu132llh(金币+5): good,鼓励新虫积极应助 2011-09-30 16:31:30
1.好好看下J SHEEN的方法,上面说的很清楚的,照做一两次就就可以得到很好的原生质体了。
2.拟南芥是你中的不好,主要是光和水,你第二片叶子就死,那是收到胁迫了。建议:放在12H光照条件下养,不要叫营养液,直接交清水,最好是去离水。
4楼2011-09-30 08:35:03
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mycqu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
jhu132llh(金币+3): good,感谢应助 2011-10-04 17:35:32
分离原生质的幼苗不宜土培,无菌苗更好些,当然酶解液也要无菌。建议14小时短日照培养,3-4周抽薹前为佳,叶片的大小视你培养的好坏有差别,此外分离前一天可以4度处理1天,将有效提高活力。
5楼2011-10-03 16:13:20
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