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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原生质体制备时如何过滤酶液，如何收集原生质体
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zdb123

银虫 (初入文坛)

[求助] 原生质体制备时如何过滤酶液，如何收集原生质体 已有2人参与

最近在做大麦糊粉层的原生质体，遇到了很多的麻烦：
        首先纤维素酶不溶解，用了CPW缓冲液，乙酸 缓冲液等等都不行；
        第二，制备不了球形的原生质体，在显微镜观察都是絮状的；
        第三，不知道怎么过滤掉酶液；
        第四，如何收集原生质体，我按照一些文献上方法，在10目的尼龙网上过滤，然后在用洗涤液在尼龙网上冲洗，收集细胞，我发现这过程中，收集率很低，而且原生质体的密度液非常低。
     还望各位大神不惜赐教，由衷的万分感激。
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知行合一
1楼 2013-12-14 17:28:20
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十比

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-17 09:55:51
zdb123: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-19 08:14:50
zdb123: 金币+5 2013-12-19 08:15:14
酶液在55度左右加热10分钟，然后用转子转几下很快会溶，收集用50-100um小孔的的小滤网（BD公司）过滤就行。你可以看看Jean Sheen的网站，上面有做拟南芥原生质的详细信息。
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2楼2013-12-17 05:04:24
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lzhwin

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zdb123: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-19 08:15:01
引用回帖:
2楼: Originally posted by 十比 at 2013-12-17 05:04:24
酶液在55度左右加热10分钟，然后用转子转几下很快会溶，收集用50-100um小孔的的小滤网（BD公司）过滤就行。你可以看看Jean Sheen的网站，上面有做拟南芥原生质的详细信息。

补充一下：纤维素酶在PH5.7的MES溶液里转子搅拌几分钟就可以溶解，这个时候是浑浊的，55度水浴10分钟后会变得澄清，酶液要用0.22微米的针头滤器过滤一下否则制备出来的原生质体容易涨菌。

最后：楼上是我们实验室老大，老大威武！
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3楼2013-12-17 11:18:31
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