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zdb123

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[求助] 原生质体制备时如何过滤酶液，如何收集原生质体已有2人参与

最近在做大麦糊粉层的原生质体，遇到了很多的麻烦：
      首先纤维素酶不溶解，用了CPW缓冲液，乙酸缓冲液等等都不行；
      第二，制备不了球形的原生质体，在显微镜观察都是絮状的；
      第三，不知道怎么过滤掉酶液；
      第四，如何收集原生质体，我按照一些文献上方法，在10目的尼龙网上过滤，然后在用洗涤液在尼龙网上冲洗，收集细胞，我发现这过程中，收集率很低，而且原生质体的密度液非常低。
   还望各位大神不惜赐教，由衷的万分感激。

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知行合一

1楼 2013-12-14 17:28:20

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【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-17 09:55:51
zdb123: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-19 08:14:50
zdb123: 金币+5 2013-12-19 08:15:14

酶液在55度左右加热10分钟，然后用转子转几下很快会溶，收集用50-100um小孔的的小滤网（BD公司）过滤就行。你可以看看Jean Sheen的网站，上面有做拟南芥原生质的详细信息。