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胡化静木虫 (小有名气)
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上下游引物的，退火温度怎么设？已有2人参与
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| 我的上下游引物的Tm相差20度，一个63.7，一个83.1，退火温度我设定的是62。P不出来，连引物二聚体都没有。有没有高手指点一下？ |
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胡化静
木虫 (小有名气)
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4楼2013-12-16 09:28:22
小木虫刘树青
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夜未眠
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2楼2013-12-15 20:18:26
【答案】应助回帖
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胡化静: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-12-16 09:21:51
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胡化静: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-12-16 09:21:51
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你好，你用的DNA聚合酶的说明书上要求的最适退火温度是多少？（有的是Tm低1-2度，有的低5度等等） 1.引物设计的原则之一就是正反向引物的Tm值尽量一致； 2.P不出来常见原因：a.退火温度太高，引物与模板互补配对结合效率低或者不能结合；b.模板GC含量太高，变性时不易解链；c.模板浓度太低；d.模板降解了 3.62度的退火温度，Tm值是83的引物理论上可以和引物互补配对结合了。 建议：1.统计模板GC含量高不高；2.降低退火温度试一试（根据你用的聚合酶的说明来降低） |
3楼2013-12-15 21:16:28
5楼2013-12-17 19:58:32
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