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zcl88811

新虫 (初入文坛)

[交流] 表达载体连接 已有2人参与

目前实验需要连接2个DNA片段， 2个片段分别是：（1）用PvuⅡ限制酶切割出片段A(A片段2端都是PvuⅡ酶切位点，所以切下来的是平末端）。（2）用EcoRⅠ线性化质粒形成片段B，片段B2端就是粘性末端了  现在我需要将这2片段连起来，方向无所谓。但是我不知道怎么连，所以求助你们 谢谢
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1楼 2013-12-13 21:49:42
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
将片段B2用T4 DNA Polymerase平端化和去磷酸化一下，回收，然后和片段A做连接
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-12-13 22:17:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
用klenow把粘性末端的载体变成平端。
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3楼2013-12-14 00:54:08
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zcl88811

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-13 22:17:07
将片段B2用T4 DNA Polymerase平端化和去磷酸化一下，回收，然后和片段A做连接

不过我不清楚的是 用PvuⅡ切割后产生的末端是怎么个情况（比如3‘端是羟基还是磷酸基团，或者5’端是羟基还是磷酸基团？  然后用EcoRⅠ切割平滑后 那末端的情况又是怎么样？
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4楼2013-12-14 14:27:24
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