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qq767299297

新虫 (小有名气)

[求助] PCR体系模板浓度问题 已有4人参与

做20ul体系PCR  P16S rDNA,用rtap酶能P出来的条件,退火温度54度,换成高保真酶prime STAR 一样的条件总是P不出来。同时测了下提取出的2号跟4号菌的基因组浓度。2号菌260ng/ul  四号菌2600ng/ul   想问问对于这个模板浓度用多少ng/ul 最好?需要稀释多少??
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wangbo2012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以调整温度梯度,看能不能P出来
4楼2013-12-14 08:54:43
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lcat

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
高保真酶的效率一般是低于taq的。你可以做个退火温度梯度,摸索一下。其它像模板浓度什么的,说明书上都有,建议楼主从头到尾看一下,基因组DNA一般稀释到10-100 ng/ul我觉得就行了
2楼2013-12-14 00:09:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不同的酶的PCR最适条件会略有不同,换酶的话有时候需要适当调整。模板浓度对PCR的效果还是很重要的。如果你模板是细菌gDNA,1-10ng/reaction
3楼2013-12-14 01:02:29
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bikexmx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以将模板稀释,做个浓度梯度,看哪个浓度P的效果最好,这个每个菌都是不同的
前方总有更多挑战,战胜恐惧,勇往向前,加油~~~~
5楼2013-12-19 10:03:10
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