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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » PCR体系模板浓度问题
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qq767299297

新虫 (小有名气)

[求助] PCR体系模板浓度问题 已有4人参与

做20ul体系PCR  P16S rDNA，用rtap酶能P出来的条件，退火温度54度，换成高保真酶prime STAR 一样的条件总是P不出来。同时测了下提取出的2号跟4号菌的基因组浓度。2号菌260ng/ul  四号菌2600ng/ul   想问问对于这个模板浓度用多少ng/ul 最好？需要稀释多少？？
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1楼 2013-12-13 17:14:30
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lcat

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
高保真酶的效率一般是低于taq的。你可以做个退火温度梯度，摸索一下。其它像模板浓度什么的，说明书上都有，建议楼主从头到尾看一下，基因组DNA一般稀释到10-100 ng/ul我觉得就行了
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2楼2013-12-14 00:09:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不同的酶的PCR最适条件会略有不同，换酶的话有时候需要适当调整。模板浓度对PCR的效果还是很重要的。如果你模板是细菌gDNA，1-10ng/reaction
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3楼2013-12-14 01:02:29
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wangbo2012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以调整温度梯度，看能不能P出来
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4楼2013-12-14 08:54:43
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bikexmx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以将模板稀释，做个浓度梯度，看哪个浓度P的效果最好，这个每个菌都是不同的
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前方总有更多挑战，战胜恐惧，勇往向前，加油~~~~
5楼2013-12-19 10:03:10
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