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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求教一下酵母电转时质粒线性化的问题，关于线性化位点
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1990xuxiao

银虫 (正式写手)

[求助] 求教一下酵母电转时质粒线性化的问题，关于线性化位点

请问大家在酵母电转用质粒线性化位点的选择的问题，一定要选择与酵母染色体同源的区域么，有哪些需要注意的地方呀！还望各位前辈指教，小虫刚开始接触，不太明白，谢谢！
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1楼 2013-12-11 08:59:24
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lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看你用哪个质粒了及酵母菌株。。。
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Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2013-12-11 09:28:41
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achillesyao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1990xuxiao: 金币+10, ★有帮助, 谢谢 2013-12-15 20:15:44
按照操作说明书上做就行，没什么太大差异。转化率都很高。
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3楼2013-12-11 10:23:21
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1990xuxiao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2013-12-11 09:28:41
看你用哪个质粒了及酵母菌株。。。

用的是汉逊酵母，质粒是自己构的，看文献说是随机整合的，所以和毕赤酵母的不一样，不知道线性化位点两端没有同源染色体DNA序列是否有关系，希望您能够指教一下
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4楼2013-12-12 09:11:53
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1990xuxiao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by achillesyao at 2013-12-11 10:23:21
按照操作说明书上做就行，没什么太大差异。转化率都很高。

用的是汉逊酵母，质粒是自己构的，看文献说是随机整合的，所以和毕赤酵母的不一样，不知道线性化位点两端没有同源染色体DNA序列是否有关系，线性化位点应该怎么选择呢，没有关系吗！
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5楼2013-12-12 09:13:06
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achillesyao

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 1990xuxiao at 2013-12-12 09:13:06
用的是汉逊酵母，质粒是自己构的，看文献说是随机整合的，所以和毕赤酵母的不一样，不知道线性化位点两端没有同源染色体DNA序列是否有关系，线性化位点应该怎么选择呢，没有关系吗！...

那和毕赤酵母是差不多的嘛，那你可以不用愁这件事，把转化的线性化DNA浓度提高到至少1微克每微升，把那些区域都填满就行。
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6楼2013-12-12 09:18:13
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1990xuxiao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by achillesyao at 2013-12-12 09:18:13
那和毕赤酵母是差不多的嘛，那你可以不用愁这件事，把转化的线性化DNA浓度提高到至少1微克每微升，把那些区域都填满就行。...

我用的浓度时10ug以上高浓度的，浓度应该没问题的，现在选的酶切位点是比较常用的，但是没有切同源的基因，那会影响整合么，还有把那些区域填满指的是什么呀，不过还是很谢谢你的呢！
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7楼2013-12-12 11:15:19
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achillesyao

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 1990xuxiao at 2013-12-12 11:15:19
我用的浓度时10ug以上高浓度的，浓度应该没问题的，现在选的酶切位点是比较常用的，但是没有切同源的基因，那会影响整合么，还有把那些区域填满指的是什么呀，不过还是很谢谢你的呢！...

毕赤酵母整合的点很多，转进去有多有少，虽然转进去。10ug、10微升这很正常，酵母能够正常表达就行了吧？
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8楼2013-12-12 14:08:10
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