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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 载体构建转化后长菌落，挑菌活化不长
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wxl.1989822

金虫 (小有名气)

[求助] 载体构建转化后长菌落，挑菌活化不长 已有1人参与

RT
本人最近在做一个真核表达载体pPIC9K的构建，想先在DH5α里克隆后再转到毕赤酵母中，现在构建过程中遇到了一些问题，连接转化后，在平板上涂布后长有很多的菌落，再挑菌到试管中，基本不长，长的菌提质粒后也是空白，不明白是为什么。平板的抗生素没有问题。
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1楼 2013-12-10 20:38:46
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-18 08:53:23
wxl.1989822: 金币+10, ★有帮助 2013-12-18 15:15:04
从平板上挑的菌落接到试管里基本不长这个现象看，你的平板还是有问题的。你可以把挑到试管里长菌的再在Amp抗性平板上划个线试试，看长出的单菌落形态如何，如果和DH5a菌落形态不一样基本可以判定染菌了。。。。有时候不要太迷信抗生素。。。。
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大家相互帮助哈
2楼2013-12-18 00:30:10
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晴晴紫儿风

新虫 (初入文坛)
把菌接到液体培养基中，连质粒也无法顺利提出，说明构建好的质粒根本就没有转进去，，那你之前在平板上长出来的菌应该是不对的。。可能是抗生素用错了。。或是你的操作出错了，你再仔细检查看看
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3楼2017-01-15 13:14:48
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