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请教 SMARTer RACE的几个问题
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liming82101920
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请教 SMARTer RACE的几个问题
大侠们,最近在看SMARTer RACE的说明书,几个问题不明白啊,困惑,特来求助:
1. SMATer技术据说其SMARTer引物以及CDS引物中都包含了Sif I的酶切位点GGCCXXXXXGGCC,我找了半天怎么没找到?
2.5‘race中合成了cDNA第一链时,在第一链的3’端已经并入了SMARTer IIA的互补序列,那么在后续的第二链合成中为什么不继续使用引导合成,而是使用了包含SMARTer IIA的LongUP引物?然后在得到完整的cDNA双链后的扩增过程中为什么又将LongUP引物又改成了ShortUP?因为我觉得用SMARTer IIA或者继续使用LongUP引物与GSP1搭配就能实现目的片段的大量扩增啊?百思不解,请高手们解疑。
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liming82101920
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