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crazymouse66

金虫 (正式写手)

[求助] 请问做普通PCR要用多大浓度的DNA?

各位虫友好,我现在是提取了土壤的总DNA, 然后想做个普通PCR。请问大家,一般做普通PCR的时候,DNA一般用多大的浓度呢?或者说在多大范围内的浓度比较好呢?谢谢大家。因为我提的DNA的量比较少,所以想把DNA浓度稀释一下再用,目前的DNA浓度大约在100-200ng/ul 吧,请问稀释后还能用吗?谢谢大家。
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
10-50ng/ul,30循环就足够了吧
jiayoubashaonian
4楼2013-11-28 10:30:40
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查看全部 15 个回答

ningning915

新虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励发贴积极交流。 2013-11-28 10:22:05
crazymouse66: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢啊,谢谢大家的帮助,谢谢! 2013-11-28 10:55:49
做pcr,模板浓度不用太高,过高还会出现拖带,你可以吸1ul,稀释50倍,做模板,应该差不多,我一般都是稀释50倍的。
2楼2013-11-28 10:10:48
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crazymouse66

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ningning915 at 2013-11-28 10:10:48
做pcr,模板浓度不用太高,过高还会出现拖带,你可以吸1ul,稀释50倍,做模板,应该差不多,我一般都是稀释50倍的。

请问你的稀释50倍所用DNA的初始浓度大概是多少呢?
3楼2013-11-28 10:24:20
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-28 10:48:20
crazymouse66: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢啊,十分感谢大家的帮助,谢谢。 2013-11-28 10:55:15
这个还真不好回答,一般模板越纯,需要的越少,PLASMID一个NG都可以,TOTAL DNA 要多些,如果你的DNA的量比较少,可以少加,增加循环数
5楼2013-11-28 10:33:59
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