应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问做普通PCR要用多大浓度的DNA?
151/2返回列表12下一页
查看: 10128  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

crazymouse66

金虫 (正式写手)

[求助] 请问做普通PCR要用多大浓度的DNA?

各位虫友好，我现在是提取了土壤的总DNA， 然后想做个普通PCR。请问大家，一般做普通PCR的时候，DNA一般用多大的浓度呢？或者说在多大范围内的浓度比较好呢？谢谢大家。因为我提的DNA的量比较少，所以想把DNA浓度稀释一下再用，目前的DNA浓度大约在100-200ng/ul 吧，请问稀释后还能用吗？谢谢大家。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-28 09:56:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ningning915

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励发贴积极交流。 2013-11-28 10:22:05
crazymouse66: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢啊，谢谢大家的帮助，谢谢！ 2013-11-28 10:55:49
做pcr，模板浓度不用太高，过高还会出现拖带，你可以吸1ul，稀释50倍，做模板，应该差不多，我一般都是稀释50倍的。
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-28 10:10:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crazymouse66

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ningning915 at 2013-11-28 10:10:48
做pcr，模板浓度不用太高，过高还会出现拖带，你可以吸1ul，稀释50倍，做模板，应该差不多，我一般都是稀释50倍的。

请问你的稀释50倍所用DNA的初始浓度大概是多少呢？
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-28 10:24:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
10-50ng/ul，30循环就足够了吧
赞一下 回复此楼
jiayoubashaonian
4楼2013-11-28 10:30:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-28 10:48:20
crazymouse66: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢啊，十分感谢大家的帮助，谢谢。 2013-11-28 10:55:15
这个还真不好回答，一般模板越纯，需要的越少，PLASMID一个NG都可以，TOTAL DNA 要多些，如果你的DNA的量比较少，可以少加，增加循环数
赞一下 回复此楼
5楼2013-11-28 10:33:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crazymouse66

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-28 10:33:59
这个还真不好回答，一般模板越纯，需要的越少，PLASMID一个NG都可以，TOTAL DNA 要多些，如果你的DNA的量比较少，可以少加，增加循环数

请问我大概稀释成10ng/ul 的浓度可以吗？我以前用这个浓度的DNA做过realtime PCR。
赞一下 回复此楼
6楼2013-11-28 10:47:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crazymouse66

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by blackrose8089 at 2013-11-28 10:30:40
10-50ng/ul，30循环就足够了吧

那我就大概稀释成10ng/ul 左右吧，因为以前用这个浓度做过realtime PCR，请问可以吗？
赞一下 回复此楼
7楼2013-11-28 10:49:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
crazymouse66: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 好吧，谢谢啊，哈哈。十分感谢大家的帮助。 2013-11-28 10:54:38
引用回帖:
7楼: Originally posted by crazymouse66 at 2013-11-28 10:49:01
那我就大概稀释成10ng/ul 左右吧，因为以前用这个浓度做过realtime PCR，请问可以吗？...

你试试看吧，可以从10ng/ul 开始，不行再调整，最后实验结果说话
赞一下 回复此楼
8楼2013-11-28 10:52:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ningning915

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by crazymouse66 at 2013-11-28 10:24:20
请问你的稀释50倍所用DNA的初始浓度大概是多少呢？...

就是提的质粒，跟你的浓度应该差不多，或者你直接吸一点，我们老板说他以前就点一下都能做出来，还很亮。
赞一下 回复此楼
9楼2013-11-28 11:24:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by crazymouse66 at 2013-11-28 10:49:01
那我就大概稀释成10ng/ul 左右吧，因为以前用这个浓度做过realtime PCR，请问可以吗？...

可以的，楼主也可以加大循环数
赞一下 回复此楼
jiayoubashaonian
10楼2013-11-28 13:41:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 crazymouse66 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 03:52 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 03:40 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 00:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +3 简单化xn 2026-08-22 7/350 2026-08-22 19:46 by 简单化xn
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 4/200 2026-08-22 16:52 by sunzitan
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭